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哈嘍，艾瑞巴蒂！今天小編本著好物需要分享，來給大家介紹一款我們轉(zhuǎn)染*——一步法核酸標記Lable IT。不需要構(gòu)建熒光表達載體就可監(jiān)測轉(zhuǎn)染效率，也可進行體內(nèi)體外示蹤，是不是很方便。

Label IT®核酸標記試劑盒為不同核酸類型提供高效、一步到位的直接標記。采用非酶標記方法和非破壞性的方式將標記共價附著到核酸上，不會改變核酸的結(jié)構(gòu)或影響下游雜交性能，下游可以直接進行體外體內(nèi)示蹤、生物素檢測、活細胞定位等。

一、標記原理及步驟

Label IT®標記試劑包含一種反應性烷基化試劑，該試劑具有通過靜電相互作用促進的強核酸結(jié)合能力。將RNA或DNA與Lable IT 在37℃混合孵育1h后純化即可獲得標記完成的核酸，即可進行下游實驗。

圖.Labie IT 原理及實驗步驟

Label IT®化學標記試劑組成：

綠色區(qū)域：標記（熒光團或半抗原）

黃色區(qū)域：促進與核酸靜電相互作用的接頭

藍色區(qū)域：反應性的烷基化基團

二、產(chǎn)品特點

無損標記任何DNA或RNA模板，應用廣泛

圖1、核酸的無損直接標記。小鼠總RNA用Label IT®Cy®3（B）電泳標記，并在Agilent RNA 6000 Nano芯片上與未標記的總RNA（A）一起分析。標記和未標記樣品的RNA完整性數(shù)（RIN）約為9.0。

操作簡單快速，僅需一個反應步驟

可調(diào)標記密度–通過最佳標記的DNA和RNA實現(xiàn)高靈敏度

圖2、靈活的標記反應條件。通過調(diào)整反應中Label IT®試劑（Mirus Bio）的量或在37°C下調(diào)整標記反應的培養(yǎng)時間，可以輕松控制標記密度。

化學標記減少了酶標整合和復制偏好

成本低，與核酸酶法標記相比，每個反應可節(jié)省50%的費用

三、如何選擇標記試劑盒

Lable IT 系列產(chǎn)品除了通用Lable IT核酸標記試劑盒外，還有優(yōu)化的標記試劑盒：Label IT® TRACKER™，用于不同類型核酸標記。以及Lable?IT®核酸修飾試劑盒，主要利用胺官能團修飾DNA或RNA。

圖3、標記試劑盒種類

四、Lable IT 系列應用案例

圖4、標記質(zhì)粒DNA的遞送及YFP報告基因表達。使用Label IT®核酸標記試劑盒CX羅丹明（Mirus Bio）標記的TransIT®-LT1（Mirus生物）和EYFP Nuc質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染COS-7細胞的共聚焦熒光顯微鏡。圖像顯示轉(zhuǎn)染羅丹明標記的質(zhì)粒DNA（紅色）和EYFP表達（黃色）8小時后的COS-7細胞。

圖5。質(zhì)粒定位和表達的間接示蹤。使用TransIT®-LT1（Mirus Bio）將Label IT®Tracker -Cy®5（Mirus生物）標記的pEYFP nuc質(zhì)粒（藍色）轉(zhuǎn)染進在wan全培養(yǎng)的COS-7細胞™中。在轉(zhuǎn)染后3、8和20小時采集圖像。藍色信號表示Cy®5標記質(zhì)粒的細胞定位，綠色信號表示細胞自發(fā)熒光，黃色信號表示核黃色熒光蛋白（YFP）報告子的表達。使用共焦顯微鏡獲取圖像。

圖6、 C6細胞中的siRNA追蹤。將C6膠質(zhì)瘤細胞接種在6孔板中的聚-D-賴氨酸涂層蓋玻片上并孵育過夜。將8µl TransIT -TKO®轉(zhuǎn)染試劑稀釋在200µl無血清培養(yǎng)基和50 nM（孔中的最終濃度）Label IT®siRNA Tracker CyTM3標記的siRNA雙鏈體添加到稀釋的TransIT -TKO®轉(zhuǎn)染試劑中以形成復合物。隨后，將這些復合物添加到wan全生長培養(yǎng)基中生長的45%融合的C6細胞中。轉(zhuǎn)染后20小時在Zeiss LSM 510共焦顯微鏡上獲得共焦圖像。

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