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關(guān)于膠原酶配置后的保存方法
閱讀：8441發(fā)布時(shí)間：2020-10-24
膠原酶是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí)，用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差，這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。 膠原酶僅對細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為*終濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
關(guān)于膠原酶的配制和保存：
1.配制的緩沖液：膠原酶應(yīng)該用氏液來配。不能用三蒸水因?yàn)闈B透壓太低細(xì)胞不能耐受，也不能用培養(yǎng)液因?yàn)槠渲械某煞謴?fù)雜對消化有影響，*也不用氏液因?yàn)镃a2+Mg2+離子易與一些成分結(jié)合形成沉淀影響分離（但這是理論上，我曾經(jīng)試過結(jié)果也還不錯），PBS文獻(xiàn)上沒見過，但應(yīng)該理論上可以用的
2.配制的方法：
書上是36.5攝氏度攪拌溶解2h；4攝氏度過夜；0.22um過濾除菌；
但網(wǎng)上有人的方法是：室溫下直接溶，好溶，溶完直接0.22um過濾除菌，據(jù)說也可行；
3.配制的濃度：1mg/ml、0.1-0.5%、0.025%（不同組織采用不同濃度）
4.配置后保存方法：
有的人推薦現(xiàn)用現(xiàn)配；
4度存放，*1~2周內(nèi)用完；
長時(shí)間貯存宜在-20攝氏度，用前可放37度溶解，但溶解時(shí)間不能過久，防止酶活性受影響；
5.消化組織時(shí)間：取決于消化液濃度和組織類型，一般消化時(shí)間為2－3小時(shí)或者4度過夜
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