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間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）如何培養(yǎng)與鑒定？
閱讀：2858發(fā)布時間：2020-10-30
相比于胚胎干細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞，MSC具有易獲取、易體外培養(yǎng)、傳代穩(wěn)定性、低免疫原性等優(yōu)勢，在體外經(jīng)過多次傳代后仍具有多向分化和自我復(fù)制的潛能，且MSCs多來自于成年的組織，研究過程的道德和倫理學(xué)問題較小。
MSC的大小與形狀具有異質(zhì)性，即不同種屬或不同組織的MSC具有不同的生長形態(tài)，例如三極形、長梭形、小圓形、短梭形和扁平形態(tài)。幾乎所有的MSC都是貼壁生長，具有較強的貼壁能力，而MSC的原代分離也正是利用了MSC強貼壁的特性。例如，骨髓MSC的分離方法為：將從組織中分離出來的單個核細(xì)胞懸浮培養(yǎng)于含有FBS的培養(yǎng)基中，1~2天后去除非貼壁細(xì)胞，保留貼壁細(xì)胞再培養(yǎng)2-3周即可獲得。此外也可采用免疫磁珠對MSC進(jìn)行分選，但這種方法成本較高。
對于MSC的鑒定，常采用的方式包括形態(tài)學(xué)鑒定，表面標(biāo)志物鑒定和多系分化潛能鑒定。MSC一般呈纖維細(xì)胞樣生長，細(xì)胞在支持物表面呈梭形或不規(guī)則三角形生長，細(xì)胞中央有卵圓形核，胞質(zhì)向外伸出2-3厘米長短不同的突起。MSC的細(xì)胞表面標(biāo)志物則常采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定，不同組織來源的MSCs可共享相同的細(xì)胞表面標(biāo)記，如CD29和CD44。但目前我們對MSC表面分子標(biāo)志物的研究還不完善，已發(fā)現(xiàn)的表面標(biāo)志物也存在特異性不強的問題，為了讓我們更好地分離、培養(yǎng)和鑒定MSC，需進(jìn)一步不斷發(fā)現(xiàn)新的特異性標(biāo)志物。
常見的方法
茜素紅染色（成骨誘導(dǎo)）
茜素紅S(AlizarinRedS)鈣染色法是一種旨在通過鰲和技術(shù)，使鈣離子和茜素紅S產(chǎn)生復(fù)合物，來分析固定處理的細(xì)胞樣本中橘紅色鈣沉積現(xiàn)象的經(jīng)典的技術(shù)方法。主要適用于動物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積和鈣化結(jié)節(jié)檢測。廣泛用于骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。
Oil Red O（油紅O）染色（成脂誘導(dǎo)）
作為脂肪細(xì)胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性，對其它的細(xì)胞結(jié)構(gòu)著色性差。成脂肪誘導(dǎo)的過程中，細(xì)胞在胞漿中不斷有油滴的累積，并不斷的增加變大，后整個細(xì)胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。
成軟骨誘導(dǎo)（試劑盒）
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