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原位雜交DNA探針的標記如何選擇購買，速來圍觀
閱讀：2432發(fā)布時間：2020-12-17
介紹
可變長度的核酸片段(DNA探針)能夠與互補的核酸鏈形成非共價、高度特異的雙鏈(稱為雜交)。當一個標簽附加到這樣一個雜交探針的檢測可以有效地服務(wù)于定義目標DNA序列標記DNA探針通常用于原位雜交實驗研究和臨床診斷特定染色體的DNA序列,以及潛在的畸變(突變。缺失和/或重復)被檢測到并定位在固定的組織和細胞內(nèi)。
原位DNA的可視化要么通過熒光讀數(shù)(熒光原位雜交(FISH))，要么通過顯色檢測(顯色原位雜交(CISH))，這依賴于酶促反應(yīng)導致有顏色的底物沉淀。
原位雜交中對DNA探針的標記通常是使用標記DNA聚合酶(=聚合酶鏈反應(yīng)(PCR))或DNA酶I/ DNA聚合酶1的混合物(-NT)(表1)
表1原位雜交DNA探針可通過Nick Translation或PCR酶標
| Nick Translation | PCR | |
| 原則 | DNA酶 I在dsDNA中引入隨機單鏈斷裂('nicks ')，隨后由DNA聚合酶I填充，使用標記的dNTP作為其天然配對物的替代物 | 一段特定核酸片段的擴增(用特定引物或多段DNA進行PCR)利用Taq聚合酶摻入標記的dNTP取代其自然對應(yīng)物的位點(用退化寡核苷酸引物進行PCR (dopo -PCR)) |
| 模板 | 線性化的dsDNA的pmol量 | 線性化的dsDNa的fmol數(shù)量 |
| 標記片段大小 | 100–500 bp dsDNA | up to 1500 bp |
| 擴增 | 否 | 是 |
熒光dUTP & dCTP
熒光dUTP和dCTP可用于酶促標記DNA探針一步完成。標記后的DNA探針可通過熒光顯微鏡或光譜直接顯示。組合標記，例如用不同或*的熒光團標記探針，允許同時顯示多個目標(多路復用)41熒光團的選擇取決于可用的激發(fā)源、濾光片組、應(yīng)用(單色或多色成像)(表2)和所需的酶標技術(shù)(Nick Translation或PCR)(表3)。
熒光團的光穩(wěn)定性和親水性都是決策時需要考慮的關(guān)鍵參數(shù)。例如，光穩(wěn)定性提高的熒光團一般可以增加靈敏度，從而提高目標序列的檢測極限。然而，熒光團的親水性直接影響相應(yīng)標記的dUTP和dCTP的基材性能用親水(如Cy3)或中度疏水染料(如德州紅)標記的dUTP和dCTP是PCR和Nick翻譯標記的理想選擇。相反，疏水熒光載體(如ATTO0647N)會導致DNA擴增的提前終止，很可能是由于染料-dve或染料-酶的相互作用，因此僅推薦用于Nick Translation。
表2所選熒光染料的光譜特性。++:好，+:中等，-:poon請注意:呋酚的性能取決于呋酚的應(yīng)用，呋酚是親水性和光穩(wěn)定性之間的一種承諾，這分別決定了親水性和光穩(wěn)定性的親水性和檢測靈敏度。
表3酶合成的熒光dUTP和dCTP。n / a:不適用
華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨產(chǎn)品：
| 品牌 | 貨號 | 名稱 | 包裝規(guī)格 |
| Jena | NU-803-XX-425-L | ATTO425-dUTP，1mM，5x10μL | 盒 |
| Jena | NU-803-XX-488-L | ATTO488-dUTP，1mM，5x10μL | 盒 |
| Jena | NU-803-XX-532-L | ATTO532-dUTP，1mM，5x10μL | 盒 |
| Jena | NU-803-TXR-L | TexasRed-dUTP，1mM，5x10μL | 盒 |
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