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淋巴細(xì)胞分離液分離白細(xì)胞方法步驟
閱讀：2157發(fā)布時(shí)間：2021-5-24
淋巴細(xì)胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細(xì)胞的密度差異，通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來。接下來為您介紹下淋巴細(xì)胞分離液分離白細(xì)胞方法步驟。
提供一個(gè)常規(guī)的方法供參考：
首先，需要注意的是在分離前使分離液恢復(fù)至室溫，離心時(shí)也應(yīng)保持室溫，因?yàn)榇藯l件下分離液的密度為標(biāo)注密度。
1. 新鮮血（肝素抗凝20u/ml）＋1640（無血清）培養(yǎng)液或PBS按照1：1 稀釋；
2. 在15ml或50ml塑料離心管中預(yù)先加入淋巴細(xì)胞分離液，使分離液：稀釋后血液=1:1；
3.小心的將稀釋后的血液加到分離液的上面；
4. 室溫 2600rpm 離心20分鐘；
5. 取出離心管，小心吸出白白的那一層，重懸于5倍體積的不*培養(yǎng)液或PBS中，混勻；
6.室溫 1500rpm 離心5分鐘；
7.吸棄上清，再加4ml不*培養(yǎng)液，混勻；
8.室溫 1000rpm離心5分鐘；
9.棄上清，用*培養(yǎng)液稀釋至2ml；
10.淋巴細(xì)胞記數(shù)；
11.按所需濃度及實(shí)驗(yàn)?zāi)康南♂尲?xì)胞，種板。
淋巴細(xì)胞分離液可用于體外分離外周淋巴血細(xì)胞，也可以從其他來源中分離單核細(xì)胞，包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞，適用于從血液及組織勻漿中分離所需細(xì)胞，在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用。其他人及動(dòng)物多種比重細(xì)胞分離液。
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