問:用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移,有時發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?
答:關(guān)于漂移問題:
1、溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
2、流動相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3、柱子未平衡好,需對柱子進行更長時間的平衡
關(guān)于快速變化問題:
1、流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定
2、泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3、流動相不合適,解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進行適當混合
問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
答:1、篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
2、存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動相或更換選擇性好的柱子
問:為什么進樣器內(nèi)的玻璃襯套會對色譜行為造成影響?
答:進樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用:
1、提供一個溫度均勻的汽化室,防止局部過熱。
2、玻璃的惰性不如不銹鋼好,減少了在汽化期間樣品分解的可能性。
3、易于拆換清洗 ,以保持清潔的汽化室表面,一些痕量非揮發(fā)性組分會逐漸積累殘存于汽化室,高溫下會慢慢分解,使基流增加,噪聲增大,通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響。
4、可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套,以改變汽化室的體積,而不用更換整個進樣加熱塊。從以上幾個方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因。
問:HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答:1、樣品量不足:解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出:可根據(jù)樣品的化學性質(zhì)改變流動相或柱子
3、樣品與檢測器不匹配:根據(jù)樣品化學性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器
4、檢測器衰減太多:調(diào)整衰減即可。
5、檢測器時間常數(shù)太大:解決辦法為降低時間參數(shù)
6、檢測器池窗污染:解決辦法為清洗池窗。
7、檢測池中有氣泡:解決辦法為排氣。
8、記錄儀測壓范圍不當:調(diào)整電壓范圍即可。
9、流動相流量不合適:調(diào)整流速即可。
10、檢測器與記錄儀超出校正曲線:解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。
問:我購買的液相色譜柱驗收測試時柱壓過高,請問為什么?
答:柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因。
1、拆去保護柱,看柱壓是否還高,否則是保護柱的問題,若柱壓仍高,再檢查;
2、把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查。
3、將柱子的進出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,(此時不要連接檢測器,以防固體顆粒進入流動性)。這時,如果柱壓仍不下降,再檢查;
4、更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。