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液相色譜檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。
01液相色譜常用檢測器:紫外吸收檢測器
紫外吸收(UV)檢測器是目前HPLC應(yīng)用廣泛的檢測器。其工作原理是朗伯-比爾定律。這種檢測器靈敏度高,線性范圍寬,對流速和溫度變化不敏感,可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測要求被檢測樣品組分有紫外-可見光吸收,而使用的流動相無吸收,或在被測組分吸收波長處無吸收。一般選擇在欲分析物有最大吸收的波長處進(jìn)行檢測,以獲得最大靈敏度和抗干擾能力。在沒有最大吸收時,可采用末端吸收。檢測波長的選擇除取決于待測物質(zhì)的成分和分子結(jié)構(gòu)外,還必須考慮流動相組成、共存組分干擾等因素。特別是各種溶劑都有一定的透過波長下限值,超過這個波長,溶劑的吸收會變得很強(qiáng),以至于不能很好地測出待測物質(zhì)的吸收強(qiáng)度。下表列出了HPLC中一些常用的溶劑透過波長的下限。
02液相色譜常用檢測器:光電二極管陣列檢測器
光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector,PDAD)又稱快速掃描紫外可見分光度計(jì),是一種新型的光吸收檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,形成多通道并行工作,同時它對光柵分離的所有波長的光信號進(jìn)行檢測,然后將其入射到陣列接收機(jī),然后快速掃描二極管陣列來采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(L)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù),從而迅速決定具有靈敏度的波長。計(jì)算機(jī)化的數(shù)據(jù)處理,還可進(jìn)行色譜峰光譜相似性比較、峰純度檢測及利用譜圖庫對樣品進(jìn)行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。
單光束二極管陣列檢測器,光源發(fā)出的光先通過檢測池,透射光由全息光柵色散成多色光,射到陣列元件上,使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來,每幅圖像僅需要10ms,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。
03液相色譜常用檢測器:熒光檢測器
熒光檢測器(fluorescence detector, FD)是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器,可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測器的原理與熒光分析法相同,化合物受紫外光激發(fā)后,發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光,稱為熒光或發(fā)射光。許多藥物和生命活性物質(zhì)具有天然熒光,能直接檢測,某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物,然后進(jìn)行熒光檢測。其最小檢測濃度可達(dá)0.1ng/mL,適用于痕量分析。一般情況下,熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級,但其線性范圍不如紫外檢測器寬。近年來,采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測器極大地增強(qiáng)了熒光檢測的信噪比,因而具有很高的靈敏度,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
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