線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱:：  線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名:Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅡActivity Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC3230           產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣         產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：2200
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡要介紹：
線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q 還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD 還原為FADH2，后者進一步還原氧化型輔酶Q 生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。
    復合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q 可進一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體45mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙tong，可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用。
試劑三：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前加入2mL丙tong溶解備用。
試劑四：液體2.5mL×1 瓶，4℃保存；
產(chǎn)品說明：
線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q 還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD 還原為FADH₂，后者進一步還原氧化型輔酶Q 生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。
復合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q 可進一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、丙tong、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、復合體Ⅱ的提?。?/span> 

1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1.0 mL提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心10min。
3. 將上清液移另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅱ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
5. 在沉淀中加入400μL提取液，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復15次），用于復合體Ⅱ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。

二、測定步驟：

1. 可見分光光度計預熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長605nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測定

1. 工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三按1：1混合，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2. 將試劑一37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）預熱15min；
3. 在1mL玻璃比色皿中分別加入：

三、復合體Ⅱ活力單位的計算：  
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅱ活力(U/mg prot)= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T= 476.2×ΔA÷Cpr
V 反總：反應(yīng)體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項：

1. 為保證實驗結(jié)果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗，如果測定的吸光值過高（高于1.5），可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結(jié)果時注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4，需將樣本稀釋適當倍數(shù)（計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度。
2. 樣品蛋白濃度需自行測定，推薦我公司BCA蛋白濃度測定試劑盒。由于提取液中含有蛋白，所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
3. 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活，若用樣本鮮重計算，則需加測胞漿提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
4. 本試劑盒試劑足夠完成25管反應(yīng)。
5. 附:使用樣本重量計算公式：（樣本檢測數(shù)為25T/12S）

A、上清中復合體II活力的計算:
按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。
復合體II活性（U/g）= [ΔA1×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T
                    =476.2×ΔA1÷W。
ΔA1：上清測定值；V 反總：反應(yīng)體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL ；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應(yīng)時間，2 min；W：樣本重量，g。
B、沉淀中復合體II活力的計算:
按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。
復合體II活性（U/g）= [ΔA2×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T
                    =190.5×ΔA2÷W。
ΔA2：沉淀測定值；V 反總：反應(yīng)體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V提?。撼恋碇貞殷w積，0.4mL ；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應(yīng)時間，2 min；W：樣本重量，g。
C、樣本復合體II總活力的計算:
樣本復合體II總活力即為上清中復合體II活力與沉淀中復合體II活力之和。
按樣本鮮重計算：
復合體II（U/g 鮮重）=476.2×ΔA1÷W +190.5×ΔA2÷W。

相關(guān)文獻：
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