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谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒
操作步驟：
一、 粗酶液提?。?/p>
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等體積：直接測定
二、 測定：
1. 分光光度計預熱30 min以上，調節(jié)波長到340 nm，用蒸餾水調零。
2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）保溫。
3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL試劑一，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。
4. 測定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL上清液，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A3和A4。
谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下 (1) 按蛋白濃度計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr (2) 按樣本質量計算 活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol/L CDNB 與 GSH 結合為一個酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W (3) 按細胞數量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每10 4個細胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細胞數量 (4) 按液體體積計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產物摩爾消光系數，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產的BCA 蛋白質濃度測定試劑盒；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間（min），5min。 b. 使用96孔板測定的計算公式如下 1) 按蛋白濃度計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr 2) 按樣本質量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W 3) 按細胞數量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細胞數量 4) 按液體體積計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結合為一個酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產物摩爾消光系數，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產的BCA 蛋白質濃度測定試劑盒；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間（min），5min。
谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質家族，主要存在于細胞質內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分，主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意，GST催化的反應減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 GST催化GSH與CDNB結合，其結合產物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。
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