內(nèi)容大綱
細胞培養(yǎng)與廢液抽吸
細胞培養(yǎng)流程
廢液抽吸方法的比較法 
細胞培養(yǎng)實驗室基礎設備
廢液處理與廢棄辦法

什么是廢液抽吸?

廢液抽吸 (aspiration / suction) 為現(xiàn)代生物學技術中常用的技術，用以移除廢棄液體。生物學中常見的細胞培養(yǎng)，是將真核或原核細胞培養(yǎng)于適宜的培養(yǎng)液 (culture medium) 及環(huán)境中，使其在受控制的狀態(tài)下生長 (growth) 及增殖 (proliferation)的過程。 細胞培養(yǎng)的流程包含解凍細胞、培養(yǎng) (cell culture)、繼代培養(yǎng) (俗稱分盤，cell subculture) 及冷凍細胞等步驟。

然而，細胞生長過程中會產(chǎn)生代謝物、細胞碎片等廢棄物影響細胞健康，甚至導致細胞凋亡 。因此在細胞培養(yǎng)過程中，需定期更換培養(yǎng)液，而移除舊有培養(yǎng)液、洗滌液的行為，則為廢液抽吸。

真空廢液抽吸裝置 (suction system, aspiration system) 常見如上圖，主要包含：

A. 真空瓶 (vacuum flask)

B. 緩沖瓶 (safety bottle)

C. 過濾器 (filter) 

D. 真空源 (vacuum source)

連接并啟動真空源后，細胞培養(yǎng)瓶/皿中的廢液會因壓力差而被抽吸、收集至真空瓶，緩沖瓶則做為防溢裝置使用，以避免廢液被抽吸至真空源內(nèi)。過濾器可使用HEPA濾膜(High Efficiency Particulate Air filter 或 0.22 µm過濾器，以過濾掉廢液及空氣中的粒子、確保抽吸效率。

細胞培養(yǎng)流程

細胞培養(yǎng)前，請確認操作環(huán)境符合無菌操作條件，且應避免和細菌實驗共享設備，以防污染。

1. 解凍細胞 (thawing cells)：將冷凍細胞以 37 oC 快速解凍、回溫，以避免細胞損傷。

2. 培養(yǎng) (cell culture)：依據(jù)細胞種類和濃度，將細胞和培養(yǎng)基均勻混合后，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3. 繼代培養(yǎng) (cell subculture)：當細胞生長至一定程度后，收集細胞，分殖于新的培養(yǎng)基中。

進行繼代培養(yǎng)時，其依細胞種類不同，處理方式可分為以下兩大類：

a. 附著型細胞 (adherent cell)，又稱貼壁培養(yǎng)、單層培養(yǎng) (monolayer culture)

· 去除舊培養(yǎng)基廢液

· 以 Phosphate buffered saline (PBS) 洗滌細胞一至二次

· 加入 trypsin-EDTA溶液，于 37 oC 下作用 2~20 分鐘，使細胞可自培養(yǎng)瓶/皿中脫落

· 加入含有血清的新鮮培養(yǎng)基中，以終止胰蛋白酶作用

· 將脫落的細胞及其團塊打散、混合均勻后，收集所有液體

· 離心后移除上清液，并添加新鮮培養(yǎng)基，依稀釋比例轉移至新的培養(yǎng)瓶/皿中進行培養(yǎng)

b. 懸浮型細胞 (suspension cell)，又稱懸浮培養(yǎng) (suspension culture)

· 將細胞培養(yǎng)液以 1000 rpm 離心 5 分鐘后，吸除上清液

· 加入適量新鮮培養(yǎng)基，與沉淀細胞混合均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養(yǎng)瓶/皿中進行培養(yǎng)。

4. 冷凍細胞 (cryopreservation)：獲得目標細胞株后，將細胞懸浮于含有 5~10 % DMSO (二甲基亞砜，dimethyl sulfoxide) 及 30~50% FBS (胎牛血清，Fetal Bovine Serum) 的新鮮培養(yǎng)液中，以 -80 oC 或液態(tài)氮等低溫設備保存。

5. 細胞計數(shù) (cell counting)：用以計算細胞濃度，可利用傳統(tǒng)血球計數(shù)器 (Neubauer chamber) 或自動計數(shù)器 ，計算細胞濃度可用來判斷目前細胞生長的情況。

廢液抽吸方法的比較

廢液抽吸目前有多種方法可以進行。 早期實驗室多利用移液器(pipette)或電動吸管抽吸廢液，然而因為需要重覆抽吸及排除液體，長時間使用下來易造成手部不適及疲勞。除此之外，電動吸管須搭配無菌刻度吸管使用，而現(xiàn)多使用拋棄式吸管排除污染疑慮，因此一次實驗下來通常會產(chǎn)生大量廢棄物，造成環(huán)境負擔。
現(xiàn)代實驗室則普遍會自行購置真空幫浦搭配真空瓶自行組裝，如此會較電動吸管有效率，且設備取得較容易，然而自組式系統(tǒng)常見許多例如：管線配置不良，造成工作環(huán)境混亂、或是玻璃吸管經(jīng)常破裂等安全性上的缺點。

Lafil 廢液抽吸系統(tǒng)及 BioDolphin 廢液抽吸套件主要為生命科學細胞培養(yǎng)或?qū)嶒炦^程中溶液抽吸應用，可直接放置于無菌無塵操作臺 (laminar flow) 使用。Lafil 廢液抽吸系統(tǒng)整合真空源、真空瓶與廢液抽吸套件，提供實驗室一體化解決方案，更比傳統(tǒng)廢液抽吸系統(tǒng)減少一半臺面占用面積，并使用圍籬式平臺固定真空瓶，避免操作者不小心碰觸瓶身而傾倒。
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細胞培養(yǎng)實驗室基礎設備

廢液處理與廢棄辦法

含有危險化學品（如氯）之有機廢液應收集至設有適當標示之專用廢液桶，不含危險化學品之其它廢液可一并收集于一般混合廢液桶，廢油則需收集于廢油桶中。細胞培養(yǎng)用的廢液應加入適當濃度的消毒劑，如漂白水(次氯酸鈉Sodium Hypochlorite)，使細胞致死，再倒入水槽或廢液桶。培養(yǎng)皿等生物醫(yī)療相關廢棄物則應置于生物醫(yī)療廢棄物袋中，進行高溫高壓滅菌后以一般廢棄物丟棄，或是請依照我國生物醫(yī)療廢棄物相關規(guī)定處理。

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