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            上海拜力生物科技有限公司

            原位雜交技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

            時(shí)間:2015-5-21閱讀:394

            關(guān)鍵詞:原位雜交技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
            簡(jiǎn)介:世界*品牌原位雜交技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
            原位雜交技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
            我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
            產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
            測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
            原位雜交組織(或細(xì)胞)化學(xué) (In situ Hybridization Histochemistry,ISHH) 簡(jiǎn)稱原位雜交(In Situ Hybridization),屬于固相分子雜交的范疇,它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針,在原位檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的方法。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交,DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。
            基本要求
            1.  組織取材:組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快,所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞在30 min 內(nèi)固定。
            2.  固定目的是:
            (1)保持細(xì)胞結(jié)構(gòu);
            (2)zui大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平;
            (3)使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。
            zui常用的固定劑是多聚甲醛,與其它醛類固定劑(如戊二醛)不同,多聚甲醛不會(huì)與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接,因而不會(huì)影響探針穿透入細(xì)胞或組織。
            3.  增強(qiáng)組織的通透性和核酸探針的穿透性:
            (1)稀酸處理和酸酐處理:為防止探針與組織中堿性蛋白之間的靜電結(jié)合,以降低背景,雜交前標(biāo)本可用0.25%乙酸酐處理10 min,經(jīng)乙酸酐處理后,組織蛋白中的堿性基團(tuán)通過乙?;蛔钄?。組織和細(xì)胞標(biāo)本亦可用0.2 M HCl處理10 min,稀酸能使堿性蛋白變性,結(jié)合蛋白酶消化,容易將堿性蛋白移除。
            (2)去污劑處理:去污劑處理的目的是增加組織的通透性,利于雜交探針進(jìn)入組織細(xì)胞,zui常應(yīng)用的去污劑是Triton X-100。注意:過度的去污劑處理不僅影響組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),而且還會(huì)引起靶核酸的丟失。
            (3) 蛋白酶處理:蛋白酶消化能使經(jīng)固定后被遮蔽的靶核酸暴露,以增加探針對(duì)靶核酸的可及性。常用的蛋白酶有蛋白酶K(proteinase K),還有鏈霉蛋白酶(pronase)和胃蛋白酶(pepsin)等。
            4.  雜交緩沖液孵育:
            雜交前用不含探針的雜交緩沖液在雜交溫度下孵育2 hr,以阻斷玻片和標(biāo)本中可能與探針產(chǎn)生非特異性結(jié)合的位點(diǎn),達(dá)到減低背景的目的。
            5.  防止污染:
            由于在手指皮膚及實(shí)驗(yàn)室用玻璃器皿上均可能含有RNA酶,為防止其污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在整個(gè)雜交前處理過程中都需要戴消毒手套,實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿及鑷子都應(yīng)于實(shí)驗(yàn)前一日置高溫烘烤(180℃)以達(dá)到消除RNA酶的目的。雜交前及雜交時(shí)所用的溶液均需經(jīng)高壓消毒處理。
            6.  雙鏈DNA探針和靶DNA的變性:
            雜交反應(yīng)進(jìn)行時(shí),探針和靶核酸都必須是單鏈的。如果用雙鏈DNA探針進(jìn)行雜交(包括檢測(cè)RNA時(shí)),雙鏈DNA探針在雜交前必須進(jìn)行變性。探針變性后要立即進(jìn)行雜交反應(yīng),不然解鏈的探針又會(huì)重新復(fù)性。
            應(yīng)用介紹
            ①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;
            ②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位,如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測(cè);
            ③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè);
            ④基因在染色體上的定位;
            ⑤檢測(cè)染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
            ⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測(cè)定等。

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