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ODC ELISA
ODC ELISA，即針對(duì)鳥an酸脫羧酶（ODC）所開展的酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)，在生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)以及醫(yī)學(xué)研究等多個(gè)領(lǐng)域中扮演著極為重要的角色。鳥an酸脫羧酶是多胺生物合成途徑中的關(guān)鍵限速酶，多胺對(duì)于細(xì)胞的生長、增殖、分化以及存活等生理過程至關(guān)重要。因此，ODC 的活性和表達(dá)水平變化與多種生理和病理狀態(tài)密切相關(guān)。
該技術(shù)基于抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理。在 ODC 試劑盒中，酶標(biāo)板已預(yù)先包被有針對(duì) ODC 的特異性抗體。當(dāng)含有 ODC 的樣本，如細(xì)胞裂解液、組織勻漿、血清等加入酶標(biāo)板孔后，樣本中的 ODC 會(huì)迅速與包被抗體特異性結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的另一種針對(duì) ODC 不同抗原表位的檢測抗體，二者結(jié)合形成穩(wěn)定的 “包被抗體 - ODC - 酶標(biāo)抗體" 三明治結(jié)構(gòu)。接著添加酶的底物，酶標(biāo)抗體上的酶催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測的信號(hào)，常見的表現(xiàn)形式為顏色變化或熒光信號(hào)。通過酶標(biāo)儀測量信號(hào)強(qiáng)度，并與試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可精確計(jì)算出樣本中 ODC 的含量。
ODC試劑盒的組成較為全面，一般包含預(yù)包被抗體的酶標(biāo)板，不同濃度的 ODC 標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，酶標(biāo)抗體工作液、底物、終止液，以及用于清洗未結(jié)合物質(zhì)的濃縮洗滌液等。同時(shí)，配備詳細(xì)的操作說明書，為實(shí)驗(yàn)人員提供從樣本采集、處理，到實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果判讀等全fang位準(zhǔn)確的操作指導(dǎo)。
在操作流程上，首先要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟杉线m的樣本。若研究細(xì)胞內(nèi) ODC 的變化，細(xì)胞裂解液是常用樣本；若關(guān)注機(jī)體整體狀態(tài)下 ODC 的情況，血清樣本可能更為合適。采集后的樣本需及時(shí)進(jìn)行離心等處理以獲取清亮的待測液。將樣本和試劑盒中的試劑平衡至室溫后，嚴(yán)格按照要求對(duì)樣本及試劑進(jìn)行準(zhǔn)確稀釋。然后精確加樣到酶標(biāo)板，在適宜溫度下溫育一段時(shí)間，確?？乖贵w充分反應(yīng)。之后用洗滌液多次洗滌酶標(biāo)板，徹di去除未結(jié)合物質(zhì)，減少非特異性信號(hào)干擾。接著依次加入酶標(biāo)抗體工作液、底物，按規(guī)定時(shí)間反應(yīng)，最后加入終止液終止反應(yīng)，并立即用酶標(biāo)儀檢測信號(hào)。
ODC 技術(shù)具有操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)勢。在基礎(chǔ)生物學(xué)研究中，有助于深入探究 ODC 在細(xì)胞生長調(diào)控、胚胎發(fā)育等正常生理過程中的作用機(jī)制，以及在腫瘤發(fā)生發(fā)展、炎癥反應(yīng)等病理狀態(tài)下的變化規(guī)律。在臨床應(yīng)用方面，可輔助多種疾病的診斷、病情監(jiān)測及預(yù)后評(píng)估，例如在腫瘤疾病中，ODC 活性升高常與腫瘤細(xì)胞的快速增殖相關(guān)，通過檢測 ODC 含量變化，能為腫瘤的診療方案制定提供重要依據(jù) 。