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大鼠15脂加氧酶15-LO/LOX試劑盒
大鼠15脂加氧酶15-LO/LOX試劑盒是專門用于精確檢測(cè)大鼠樣本中 15 脂加氧酶（15-LO/LOX）含量的專業(yè)工具，在大鼠模型相關(guān)的醫(yī)學(xué)研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。15-LO/LOX 是一種含非血紅素鐵的雙加氧酶，能夠催化多元不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化反應(yīng)，生成具有生物活性的氧化代謝產(chǎn)物，在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡、組織修復(fù)等多種生理和病理過程中扮演重要角色。
該試劑盒多采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)，其核心原理基于抗原與抗體的特異性結(jié)合。試劑盒內(nèi)的酶標(biāo)板預(yù)先包被有針對(duì)大鼠 15-LO/LOX 的高純度特異性抗體。當(dāng)含有 15-LO/LOX 的大鼠樣本，如血清、血漿、組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清等加入酶標(biāo)板孔后，樣本中的 15-LO/LOX 會(huì)迅速與包被抗體特異性結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的另一種針對(duì) 15-LO/LOX 不同抗原表位的檢測(cè)抗體，二者結(jié)合形成穩(wěn)定的 “包被抗體 - 15-LO/LOX - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。接著添加酶的底物，酶標(biāo)抗體上的酶催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)，常見為顏色變化或熒光信號(hào)。通過酶標(biāo)儀測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度，并與試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可精確計(jì)算出樣本中 15-LO/LOX 的含量。
試劑盒的組成較為豐富，一般包含預(yù)包被抗體的酶標(biāo)板，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的不同濃度 15-LO/LOX 標(biāo)準(zhǔn)品，酶標(biāo)抗體工作液、底物、終止液，以及用于清洗未結(jié)合物質(zhì)的濃縮洗滌液等。同時(shí)，還配備了詳細(xì)且易于理解的操作說明書，為實(shí)驗(yàn)人員提供從樣本采集、處理，到實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果判讀等全fang位準(zhǔn)確的操作指導(dǎo)。
在操作流程上，首先要依據(jù)研究目的采集合適的大鼠樣本。若研究全身性生理病理變化，血清或血漿樣本較為常用；若聚焦特定組織或細(xì)胞層面的 15-LO/LOX 功能，組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本更具針對(duì)性。采集后的樣本需及時(shí)進(jìn)行離心等處理以獲取清亮的待測(cè)液。將樣本和試劑盒中的試劑平衡至室溫后，嚴(yán)格按照要求對(duì)樣本及試劑進(jìn)行準(zhǔn)確稀釋。然后精確加樣到酶標(biāo)板，在適宜溫度下溫育一段時(shí)間，確?？乖贵w充分反應(yīng)。之后用洗滌液多次洗滌酶標(biāo)板，徹di去除未結(jié)合物質(zhì)，減少非特異性信號(hào)干擾。接著依次加入酶標(biāo)抗體工作液、底物，按規(guī)定時(shí)間反應(yīng)，最后加入終止液終止反應(yīng)，并立即用酶標(biāo)儀檢測(cè)信號(hào)。