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實(shí)驗(yàn)室新手指南之DNA&RNA提取
DNA 提取
- 取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入 1.5 ml Eppendorf 管中;
- 加入 800 μl 的 CTAB 提取緩沖液，混勻(CTAB 在 65℃水浴預(yù)熱)，每5min輕輕震蕩幾次，20min后12000 r/min，離心15 min;
- 小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯fang(各 400μl)溶液，混勻，4℃，12000 r/min，離心 10 min;
- 小心吸取上清液，加入等體積的氯fang，混勻，4℃，12000 r/min，離心 10 min；
- 重復(fù)步驟(4)1-2 次，以蛋白層不出現(xiàn)為止;
- 取上清，-20℃沉淀 1h，4℃，12000 r/min，離心 10 min;
- 棄去上清液，用 70%乙醇洗滌沉淀 2 次;
- 室溫下干燥后(一般干燥 5-15 min)，溶于 30-50 μl DEPC 去離子水中，于-20℃或者-70℃下保存?zhèn)溆谩?/span>
RNA 提取
樣品處理：
- 培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞 1-5×107，移入 1.5ml 離心管中，加入 1ml Trizol，混勻，室溫靜置 5min。
- 組織：取 50-100mg 組織(新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可)置 1.5ml 離心管中，加入 1ml Trizol 充分勻漿，室溫靜置5min。
提取步驟：
- 加入 0.2ml 氯fang，振蕩 15s，靜置 2min。
- 4℃離心，12000g×15min，取上清。
- 加入 0.5ml 異丙醇，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置 10min。
- 4℃離心，12000g×10min，棄上清。
- 加入 1ml 75%乙醇，輕輕洗滌沉淀。4℃，7500g×5min，棄上清。
- 晾干，加入適量的 DEPC H2O 溶解(65℃促溶 10-15min)。