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Strep-tag II磁珠 技術(shù)問答
Strep-tag II磁珠
海貍Strep-tag II磁珠可以在生理?xiàng)l件下純化得到使Strep-tag融合蛋白。與其他tag相比，這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性，并僅經(jīng)一步層析后即可產(chǎn)出超過99%的純度。
1.Strep-tagII磁珠純化的技術(shù)原理是什么呢？
答：主要基于Strep –tagII多肽與Strep-Tactin（一種經(jīng)過特殊工藝改造的鏈酶親和素）的相互作用，在生理緩沖液或是含有其他添加劑的環(huán)境下，帶有標(biāo)簽的蛋白與固定化的Strep Tactin親和純化，經(jīng)過加有2.5mM脫硫生物素的同種緩沖溶液中即可溫和地將純化的重組蛋白洗脫下來。 這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性，并可獲得純度超過99%的目標(biāo)蛋白。
2.Strep-tagII的分子量大約是多少？通常在融合蛋白的什么位置？
答：Strep-tagII多肽有8個(gè)氨基酸( Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）分子量約為1KDa.作為標(biāo)簽可以在蛋白的N端或是C端，也可以作為兩個(gè)蛋白域的鏈接，甚至可以用于換種結(jié)構(gòu)中。
3.Strep-tag磁珠的載量如何呢？
答：海貍納米磁珠蛋白結(jié)合量可以達(dá)到7mg Strep-tag II蛋白 /mL Gel
4.純化蛋白的純度如何？
答：純度＞95%。但是如果存在重組蛋白非特異性互作就可能降低蛋白純度。為了減少污染，可以再結(jié)合洗滌和洗脫時(shí)加入合適的添加劑(如還原劑，鹽，溫和的去污劑)。如果是二硫鍵共價(jià)結(jié)合的雜蛋白，可以在緩沖液中加入還原劑。非共價(jià)鍵結(jié)合一般采用提高離子強(qiáng)度的方法，常用NaCl或Triton X-100，Tween20和CHAPS等。
5.Strep-tagII磁珠結(jié)合抗生素的蛋白嗎？
答: 不會。
6.洗脫下來的蛋白質(zhì)混有脫硫生物素嗎？
答:沒有，脫硫生物素不會與蛋白結(jié)合貨干擾蛋白分析，而且容易通過透析或是過濾去除。