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淺析DNA提取生物磁珠的4個(gè)關(guān)鍵參數(shù)
DNA提取生物磁珠屬于生物生物磁珠的一種，其中心為氧化鐵內(nèi)核，中層包裹封閉基質(zhì)，外層修飾官能團(tuán)。應(yīng)用于DNA吸附與提取純化的領(lǐng)域，具有一些重要的參數(shù)要求，如半沉降時(shí)間，磁吸時(shí)間，粒徑，比表面積，表面官能團(tuán)密度等。參數(shù)的差異不僅會(huì)導(dǎo)致操作復(fù)雜程度的不同，更會(huì)導(dǎo)致提取結(jié)果的不同，我們?cè)谶x擇DNA提取生物磁珠的時(shí)候，更要注重參數(shù)的區(qū)別，以下4種參數(shù)是選擇DNA提取生物磁珠的有效參考。
1、懸浮性
DNA提取生物磁珠雖然具有一定的流動(dòng)性，能夠均勻分散在液體中，跟隨液相進(jìn)入實(shí)驗(yàn)體系，但生物磁珠畢竟還是固體，會(huì)在液體中以一定速度沉降。所以DNA提取生物磁珠的半沉降時(shí)間應(yīng)在2min以上，才能保證加入生物磁珠時(shí)不會(huì)因?yàn)槌两颠^快而導(dǎo)致加入量不準(zhǔn)確，如果是多樣本的操作，對(duì)生物磁珠的半沉降時(shí)間要求應(yīng)該更高。生物磁珠良好的懸浮性，可以在操作過程中不用頻繁混勻生物磁珠，方便快捷的同時(shí)增加了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和均一性。
2、磁吸時(shí)間
DNA提取生物磁珠攜帶目的DNA與體系中雜質(zhì)分離的過程，主要是通過外加磁場使生物磁珠定向移動(dòng)并達(dá)到固液分離的目的，所以生物磁珠的磁吸時(shí)間會(huì)影響固液分離的時(shí)間，有些品牌的生物磁珠磁吸速度特別慢，這就影響了整體實(shí)驗(yàn)效率。DNA提取生物磁珠，磁吸時(shí)間均小于30s，適應(yīng)手動(dòng)和儀器操作進(jìn)行核酸純化的實(shí)驗(yàn)頻率。
3、比表面積
部分使用DNA提取生物磁珠的實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)為粒徑越小的生物磁珠比表面積越大吸附效果也越好，這種想法并不*正確。因?yàn)樯锎胖楸砻娌⒉皇枪饣秸那蛎妫窃谥虚g基質(zhì)層有孔洞，外圍修飾集團(tuán)有凸起的，比表面積并不由粒徑大小決定，而且也并不是比表面積越大吸附效果就越好的。有研究表明，當(dāng)比表面積在60m2/g時(shí)，對(duì)核酸的吸附效果較好。粒徑在300nm左右的生物磁珠包被基質(zhì)層薄內(nèi)陷孔洞少，孔容孔徑低；粒徑在1um左右的生物磁珠包被基質(zhì)層厚，表面有大量孔洞，兩者比表面積都可以達(dá)到60m2/g左右。
4、官能基團(tuán)
一般認(rèn)為DNA提取生物磁珠表面官能團(tuán)能越密集，對(duì)DNA的吸附效果越好，但考慮到空間位阻、電荷斥力，過高濃度使官能團(tuán)陷入生物磁珠內(nèi)部等原因，DNA提取生物磁珠的表面官能團(tuán)數(shù)量并不是越多越好的。適當(dāng)?shù)慕档蜕锎胖樯a(chǎn)過程中官能團(tuán)修飾原料，可以很好的控制DNA提取生物磁珠的粒徑和吸附量平衡。