無(wú)菌操作是決定細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素，即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室，若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，操作不規(guī)范，也會(huì)導(dǎo)致污染。因此，所有操作都要最大可能的保證無(wú)菌，每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和*可靠。
1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前：在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品，如二氧化碳培養(yǎng)箱、凈化工作臺(tái)、離心機(jī)等，清點(diǎn)無(wú)誤后將其放置操作場(chǎng)所(培養(yǎng)室、超凈臺(tái))內(nèi)，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后，因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì)。
2、無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70% ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。
3、 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4、工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。
5、定期檢測(cè)下列項(xiàng)目
（1）CO2 鋼瓶的CO2 壓力；
（2）CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無(wú)菌水，每周更換)； 二氧化碳培養(yǎng)箱定期消毒；（3） 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)氣流壓力是否正常，定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)(300 小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA)。
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