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       一、實(shí)材料及試劑

       培養(yǎng)板、酒精燈、移液槍、CO2培養(yǎng)箱、顯微鏡等MC3T3-E1（前成骨細(xì)

       二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

       試驗(yàn)方法：將MC3T3-E1（前成骨細(xì)胞）細(xì)胞接種于含MEM-α培養(yǎng)基（10%胎牛血清，1%青鏈霉素）的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放置于二氧化碳培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2，潮濕）培養(yǎng)，每三天更換一次培養(yǎng)液，待細(xì)胞鋪滿瓶底的80%以上時(shí)，用胰蛋白酶消化，加入MEM-α培養(yǎng)基（10%胎牛血清，1%青鏈霉素），將細(xì)胞吹打下來并吸取到10 mL離心管中，離心，棄上清，注意不要碰到管口，加入MEM-α培養(yǎng)基（10%胎牛血清，1%青鏈霉素）重懸，將細(xì)胞按照每孔1.2×105個(gè)細(xì)胞數(shù)接種于六孔板中，實(shí)驗(yàn)組加含誘導(dǎo)劑（50ug/mL抗壞血酸和10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉）的培養(yǎng)液，對(duì)照組用常規(guī)培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，每三天更換一次培養(yǎng)液。

       三、注意事項(xiàng)

       1、實(shí)驗(yàn)操作過程中要避免污染。
       2、消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)。
       3、誘導(dǎo)后細(xì)胞易脫壁，換液操作要盡可能輕。