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            青島捷世康生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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            厭氧培養(yǎng)系列
            elisa試劑盒
            兔ELISA試劑盒
            培養(yǎng)基
            標(biāo)準(zhǔn)品
            化學(xué)試劑
            實(shí)驗(yàn)室耗材
            透析袋
            層析柱
            凝膠過濾填料
            疏水層析填料
            親和層析填料
            離子交換填料
            溶液
            抗體
            測試盒
            人ELISA試劑盒
            大鼠ELISA試劑盒
            小鼠ELISA試劑盒
            染色試劑盒
            染液
            標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
            載體菌株

            通用基因組 DNA 提取試劑盒使用說明書

            時(shí)間:2019/12/10閱讀:2140
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            通用基因組 DNA 提取試劑盒使用說明書

            規(guī)格:50T/ 100T

            保存:室溫(15-25) 干燥保存,復(fù)檢期 12 個(gè)月,2-8℃保存時(shí)間更長。開封后請(qǐng)將 RNase A,蛋白酶 K-20℃保存。

                    試劑盒內(nèi)容:     50T         100T

                     RNase A             1ml             1ml×2

                            蛋白酶 K             1ml            1ml×2

                            溶液 A                25ml            50ml

                            溶液 B                25ml            50ml

                      漂洗液          15ml      15ml×2

                      洗脫液                 15ml              30ml

                      吸附柱           50個(gè)       100個(gè)

                      收集管           50個(gè)       100個(gè)

                       說明書           1份        1份

            產(chǎn)品簡介:

                本試劑盒為通用型,適合于從土壤,糞便,昆蟲,以及其他樣本中提取基因組 DNA。對(duì)細(xì)菌,真菌,昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果,大限度的保留了生物 DNA 的多態(tài)性。

                 使用本試劑盒提取的 DNA 產(chǎn)量大、完整性好,可直接用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR 、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

            操作步驟:

                 使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)

            在室溫下離心。

            1、樣品的處理:

            1)土壤:稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤,放入研缽中,倒入適量的液氮,立即研磨,重復(fù) 3 次,使土壤顆粒研成粉末,加 500ul 溶液 A,振蕩至*懸浮。

            2)糞便:稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便,加 500ul 溶液 A,振蕩至*懸浮。

            3)昆蟲:稱取 0.1-0.3g 昆蟲,倒入適量的液氮,立即研磨,重復(fù) 3 次,使昆蟲研成粉末,加 500ul 溶液A,振蕩至*懸浮。

            4)未知樣品,如為細(xì)未狀,可直接稱取 0.1-0.3g(根據(jù)干濕) 500ul 溶液 A,如為塊狀,可 0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未,再加 500ul 溶液 A,振蕩至*懸浮。

            2、向懸浮液中加入 20ul  RNase A10mg/ml),55℃放置 10min。

            3、加入 20ul 的蛋白酶 K10mg/ml),充分混勻,55℃水浴消化,30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,12000 轉(zhuǎn)離心 10min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。

            4、加入 500ul 溶液 B,充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,于 55℃放置 5min,沉淀即會(huì)消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說明樣品消化不*,可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純,還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,請(qǐng)?jiān)?/span>加消化時(shí)間。

            5、加入 500ul 無水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響 DNA 的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置 2min (分兩次加入,每次 700ul)。

            6、12000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

            7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

            8、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中

            9、12000rpm 離心 2min,將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。

            10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放 5min,12000rpm 離心 2min

            11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心 2min,即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。

            注意事項(xiàng):

            1、由于樣品不同,終提取的 DNA 含量和純度也有所不同,一般來說,如果所提取 DNA 用電泳的方法檢測不到,PCR 會(huì)有結(jié)果,樣品盡可能的新鮮。否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

            2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。

            3、如果樣品消化不*,后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況,可適當(dāng)延長離心時(shí)間。

            4、洗脫緩沖液的體積不少于 50ul,體積過小會(huì)影響回收效率;洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率;DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解。

            5DNA 濃度及純度檢測(濃度較高時(shí)):得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰, OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNAOD260/OD280 比值應(yīng) 1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)?/span> pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。

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