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            青島捷世康生物科技有限公司
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            厭氧培養(yǎng)系列
            elisa試劑盒
            兔ELISA試劑盒
            培養(yǎng)基
            標(biāo)準(zhǔn)品
            化學(xué)試劑
            實(shí)驗室耗材
            透析袋
            層析柱
            凝膠過濾填料
            疏水層析填料
            親和層析填料
            離子交換填料
            溶液
            抗體
            測試盒
            人ELISA試劑盒
            大鼠ELISA試劑盒
            小鼠ELISA試劑盒
            染色試劑盒
            染液
            標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
            載體菌株

            DNS 試劑(Ghose法)說明書

            時間:2021/6/4閱讀:5968
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            產(chǎn)品簡介:

            植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀,常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,具有還原性,屬于還原糖;多糖和蔗糖等屬于非還原糖??梢岳枚嗵悄鼙凰崴鉃閱翁堑奶匦酝ㄟ^測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。

            DNS 試劑(Ghose 法)主要成分是苯酚、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、亞硫酸氫鈉和 3,5-二硝基水楊酸,可用于測定植物總糖和還原糖的檢測,其原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在 540nm 處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度,該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系,利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

            自備材料:

            1、蒸餾水

            2、50ml 離心管

            3、離心機(jī)

            4、水浴鍋或恒溫箱

            5、分光光度計

            6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

            操作步驟(僅供參考)

            1、還原糖的提?。?/span>

            ①稱取植物樣品 0.5~3g,剪碎,加入蒸餾水約 3ml 勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

            ②50℃水浴 30min,并不時攪拌,以便還原糖*浸出。

            ③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管,4000g 離心 5min。

            ④留取上清液,向沉淀中加入 20ml 蒸餾水,混勻,再次 4000g 離心 5min。

            ⑤留取上清液,將 2 次獲得的上清液合并,用蒸餾水定容至 100ml(提取液),混勻,作為還原糖待測液。

            2、總糖的水解和提?。?/span>

            ①稱取植物樣品 0.5~3g,剪碎,加入蒸餾水約 3ml 勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用 12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

            ②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液,攪拌均勻,煮沸 30min,并不時攪拌。

            ③取 2 滴滴加于載玻片上,滴加 1 滴顯色液,檢查水解是否*,如已經(jīng)水解*則不顯示藍(lán)色。

            ④水解完畢后,冷卻至室溫,加入 6M 氫氧化鈉溶液,使溶液 pH  7.4 左右,用蒸餾水定容至 100ml,混勻,4000g 離心 5min 或過濾,獲得上清或濾液。

            ⑤取上清或濾液 10ml,用蒸餾水定容至 100ml,成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液),取1ml 總糖水解液,測定其還原糖的含量。

            3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:取干凈離心管或試管,按下表進(jìn)行操作,以 0 號調(diào)零,檢測 540nm 處吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

             

            4、還原糖測定:取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1ml,分別加入 DNS 試劑 2ml, 其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作,540nm 處測定各管的吸光度。

            計算:

            還原糖的百分含量:

            還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

            總糖的百分含量:

            總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

            式中:

                 C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)

             VT=提取液的體積(ml)

             m=植物樣品的質(zhì)量(mg)

            Vs=測定時用的樣品體積(ml)

             

            DNS 試劑(Ghose法)注意事項:

            1、 該試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降,盡量避光保存。

            2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時,應(yīng)小心操作,避免傷人。

            3、 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為 11.6M,應(yīng)稀釋至 6M 后使用。

            4、 待測樣本如不能及時測定,應(yīng)置于 2~8℃保存,3 天內(nèi)穩(wěn)定。

            5、 如果樣品還原糖濃度過高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

            6、 總糖計算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用,×0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時所消耗的水量。

             

            有效期: 12 效。

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