主要用途

細(xì)胞總游離膽固醇菲律賓（FILIPIN）熒光染色試劑是一種旨在通過熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與膽固醇結(jié)合，形成復(fù)合體，并產(chǎn)生藍(lán)色熒光現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種細(xì)胞（動(dòng)物、人體等）或培養(yǎng)細(xì)胞中游離膽固醇分布的檢測(cè)。廣泛用于細(xì)胞病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于S. FILIPINENSIS細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式為C35H58O11，分子量為654.8。菲律賓與游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）  毫升

固著液（Reagent B）  毫升

抗干擾液（Reagent C）  毫升

染色液（Reagent D）  毫升

產(chǎn)品說明書  1份

保存方式

保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 樣本固著處理

1． 準(zhǔn)備1個(gè)48孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞或載波片的細(xì)胞

2． 小心抽去48孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液  

3． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)樣品表面

4． 小心移去清理液（Reagent A）

5． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟3至4二次

6． 小心加入xx微升固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面

7． 室溫下孵育30分鐘

8． 小心移去固著液（Reagent B）

9． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面

10． 小心移去清理液（Reagent A）

11． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次

二、樣本染色處理

1． 小心加入xx微升抗干擾液（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面

2． 室溫下孵育10分鐘

3． 小心移去抗干擾液（Reagent C）

4． 小心加入xx微升染色液（Reagent D），鋪滿整個(gè)樣品表面

5． 室溫下孵育30分鐘，避免光照

6． 小心移去染色液（Reagent D）

7． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面

8． 小心移去清理液（Reagent A）

9． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8二次

10． 小心加入xx微升清理液（Reagent A）

11． 即刻在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長(zhǎng)：340nm；散發(fā)波長(zhǎng)：430nm――膽固醇陽性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為50次（48孔細(xì)胞培養(yǎng)板）操作

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 操作時(shí)，避免污染母液

4． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面

5． 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 

6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用抗淬滅劑Ⅰ－12058.2

7． 本產(chǎn)品使用載玻片細(xì)胞染色后，可用于電鏡分析

8． 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：