苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒                            分光光度法  50管/48樣

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

PAL（EC4.  3 1  5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類(lèi)代謝的

關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類(lèi)植保素、黃酮類(lèi)色素等合成密切相關(guān)，

在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。

測(cè)定原理

PAL催化  L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm處有zui大吸收值，

通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算 PAL活性。

所需的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1  mL石英比色皿、研缽、冰

和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體 40mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL  蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 2.5mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL

提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

混勻，靜置10min后，290nm處記錄測(cè)定管吸光值A(chǔ)1和對(duì)照管吸光值A(chǔ)2，△A=A1-A2。

注意：對(duì)照管只要做一管

PAL活性計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶

活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，1.04mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液

體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；