可溶性果膠(WSP)含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

果膠是構成細胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細胞壁中含量zui豐富的多糖成分，其*的物理、化學性質影響著植物源食品的口感和品質。果膠間以 Ca²⁺ 橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián)，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結合型果膠（ISP）和共價結合果膠（CSP）。

測定原理：

利用酸溶液提取得到（WSP）可溶性果膠，采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑試劑進行縮合反應，生成物質在 530 nm 處有zui大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 50mL× 1 瓶，4℃保存。試劑二：液體 50mL× 1 瓶，4℃保存。試劑三：標準液 1mL× 1 支，4℃保存。試劑四：液體 5 mL× 1 瓶，4℃保存；

樣品的前處理：

1、 細胞壁的提取：取約 0.3g 樣本，加入 1mL 80％乙醇，室溫快速勻漿，95℃水浴 20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心 10min，棄上清。沉淀加入 1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右，4000g 25℃離心 10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁，加入 1mL 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時，4000g 25℃離心 10min，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細胞壁物質（CWM）。

2、 WSP 的提?。?/span>稱取烘干的 CWM 3mg，加入 1mL 試劑二，充分勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清液待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 530nm 處，蒸餾水調零；試劑三和試劑四 37℃ 預熱 10min 以上；2、操作表：

混勻 95℃水浴 5min 后，530nm 處讀取吸光值，空白管、標準管、對照管和測定管吸光值分別記為 A1、A2、A3 和 A4。若 A 大于 2，需將待測樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋 10 倍或 20倍）?？瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?，每個測定管需設一個對照管。

WSP 含量計算：

WSP 含量(mg /g 干重)= (C 標準×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)

C 標準：標準管濃度，0.05mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；W：樣本干重，g。

注意：zui低檢測限為 50μg /g 干重