血流紊亂所引起的剪切應(yīng)力降低，將會損害內(nèi)皮完整性，促進血管炎癥病變的發(fā)展。今天，和大家分享的實驗是金屬蛋白酶ADAM15在剪切應(yīng)力作用下上調(diào)，促進內(nèi)皮細胞存活。

小編分享的內(nèi)容主要來自國外的一篇名為《The metalloproteinase ADAM15 is upregulated by shear stress and promotes survival of endothelial cells》的研究報告。

ADAM家族的金屬蛋白酶已參與細胞存活和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。當內(nèi)皮細胞受到生理剪切應(yīng)力時，ADAM家族內(nèi)ADAM15mRNA上調(diào)(4倍)。這種誘導(dǎo)作用在靜脈、動脈和微血管內(nèi)皮細胞中得到證實，并與ADAM15蛋白在細胞裂解液中(5.6倍)和細胞表面(3.1倍)的表達增加有關(guān)。ADAM15啟動子含有轉(zhuǎn)錄因子KLF2的多個一致位點，也受到剪切應(yīng)力的上調(diào)。

研究介紹

內(nèi)皮細胞不斷暴露于血流，會導(dǎo)致內(nèi)皮表面層流剪切應(yīng)力。

內(nèi)皮表面的剪切應(yīng)力在大動脈和小動脈或靜脈中明顯不同。

內(nèi)皮細胞對血管系統(tǒng)中流動條件減少的病理反應(yīng)與轉(zhuǎn)錄變化有關(guān)。

解整合素和ADAM（金屬蛋白酶）家族成員與各種內(nèi)皮細胞功能有關(guān)。

實驗方法

慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)：使用MISSION®shRNA進行系統(tǒng)短發(fā)夾RNA的慢性病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。對于ADAM15敲低。并對pLKO.1puro質(zhì)粒進行編號。

流式細胞分析：以添加0.2% BSA的PBS作為檢測緩沖液染色過程的步驟在4°C下進行。HUVECs是通過小鼠孵育分析ADAM15的表達抗ADAM15單克隆抗體(5 μg/ml)與apc偶聯(lián)的抗小鼠抗體(1:200)。

細胞凋亡測定：10ng /ml TNF和10ng /ml TNF均可誘導(dǎo)細胞凋亡，用無血清培養(yǎng)基去除生長因子培養(yǎng)24小時，然后用三種不同的方法確定Tosis。對最終點分析，對于live-cell成像后，細胞用fitc標記的annexin V在Hanks中孵育緩沖鹽溶液(HBSS)， 30分鐘以綠色熒光區(qū)域的比例確定相對凋亡和總的細胞面積在至少8個圖像為每一條件使用。

總結(jié)

1.剪切應(yīng)力上調(diào)內(nèi)皮ADAM15表達。

人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)在靜態(tài)或者不同流動條件下培養(yǎng)。在流動條件下的內(nèi)皮細胞獲得了細長的形狀并在流動方向上對齊。

2.流體剪切應(yīng)力引起的ADAM15上調(diào)涉及KLF2。

轉(zhuǎn)錄因子KLF2受剪應(yīng)力誘導(dǎo)，負責調(diào)控大部分剪切應(yīng)力敏感基因，實驗證實，實驗設(shè)置中，KLF2mRNA的表達是通過剪切應(yīng)力調(diào)控的。

3.ADAM15缺失時炎癥基因誘導(dǎo)和凋亡增強。

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