異鱗蛇鯖源性成分探針?lè)╭PCR試劑盒不含內(nèi)參

Pseudogyrincheilus procheilus-Ingredient Probe qPCR Kit (without internal control)

異鱗蛇鯖源性成分探針?lè)╭PCR試劑盒不含內(nèi)參產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有異鱗蛇鯖源性成分。現(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本公司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的異鱗蛇鯖源性成分探針?lè)晒舛?PCR檢測(cè)試劑盒它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到 100 拷貝/反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)異鱗蛇鯖源性成分DNA 高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量時(shí)其線(xiàn)性范圍不少于 5 個(gè)數(shù)量級(jí)。

6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分：

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。
自備試劑 樣品 DNA。

異鱗蛇鯖源性成分探針?lè)╭PCR試劑盒不含內(nèi)參使用方法：
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 6 號(hào)管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 上步所得 4 號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的起始體積一樣，以此作為

PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)

用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（直接用第 6 步第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：

四、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上推算出樣品 DNA濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須沒(méi)有數(shù)值，或者 Ct 值等于或者大于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線(xiàn)，Ct 值應(yīng)該小于 40。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 小于 40 則為陽(yáng)性。如果沒(méi)有 Ct 值，或大于或等于 40 則為陰性。
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