一站式植物mRNA OUT產(chǎn)品及特點(diǎn)
構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常
常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾
巴，所以可以通過與Oligo(dT)纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA
等）分離開。本產(chǎn)品專門用于從植物組織中一站式提取mRNA，其操作如下：
一站式植物mRNA OUT它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，是由天恩澤的高效、無多糖柱式植物RNA提取試劑和mRNA提取試劑
兩個產(chǎn)品整合而成，即開即用，非常方便。
2. 一次可以處理50-500 mg的植物組織，能得到約10-15 μ g總RNA，從中可得
0.1-0.5 μg左右的mRNA。
3. Oligo(dT)纖維素吸附能力強(qiáng)，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相當(dāng)于
2000-3000 μg mRNA。
4. mRNA提取過程操作簡單，只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱
等繁瑣操作。
5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
使用及效果
1. 用植物RNA OUT 的方法提取植物總RNA，zui后用50 μ L洗脫，將兩管收集在
一起，共得到100 μ L總RNA（詳見柱式植物RNA OUT 的使用手冊）。
2. 從總RNA中純化mRNA：將0.5 mL 溶液A（結(jié)合液）加入到一管裝有
Oligo(dT)纖維素的離心管中，放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA
100 μ L加熱到65℃ 5分鐘后加入等體積的溶液A，轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離
心管中，顛倒混勻數(shù)次，離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個離心管中。用0.5 mL溶液A，混
勻后4℃ 200 g 離心5分鐘，小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次。用RNase-free水洗脫
mRNA。
3. 用微量核酸沉淀劑沉淀mRNA（詳見微量核酸沉淀劑使用手冊）。
注：所得mRNA只占總RNA的5%左右，很微量很珍貴，一般不宜電泳檢測。100805A-100    酚 -  - 異戊醇混合液 (RNA 提取 )    100mL    90    1-65
100805B-100    酚 -  - 異戊醇混合液 (DNA 提取 )    100mL    90    1-65
100806-100    Earle 溶液    100mL    120    8-3
100807-100    杜氏 PBS 緩沖液 ,10×    100mL    90    8-4
100808-1    溴化乙錠干粉 (EB)    1g    157    3-16
100809-100    SSPE 溶液 ,20×    100mL    120    4-14
100810-1000    超快蛋白銀染試劑盒    1000mL    790    7-89
100811-10    質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒    10 次    890    7-90
100812-100    BLOTTO 溶液    100mL    390    4-15
100813-250    干粉型 SOB 培養(yǎng)基    250g    390    6-41
100814-5    Oligo dT12-18 引物，0.5μg/μL    5μg    90    5-30
100815-1.5    溶菌酶溶液，10mg/mL    1.5mL    90    10-105
100816-250    堿性膠電泳液 ,10×    250mL    90    3-7
100819-1    MDS 42T7lac 菌種    1mL    990    6-29j
100820-250    干粉型 LB-Lennox 培養(yǎng)基    250g    390    6-40