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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0081	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒

Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

禽致病性大腸桿菌 O1 血清型（Avian Pathogenicity Escherichia coli， APEC）會(huì)引發(fā)大腸桿菌敗血癥，尤其在冬季發(fā)病率高，死淘率通常在 5%-20%，嚴(yán)重的可達(dá) 50%，雛雞在夏季也較多發(fā)，病雞精神不振，采食減少，衰弱和死亡，病雞腹部膨滿，排出黃綠色的稀便，特征性的病變是纖維素性心包炎，氣囊混濁肥厚，有干酪樣滲出物，肝包膜呈白色混濁，有纖維素性附著物，有時(shí) 可見白色壞死斑，脾充血腫脹，給養(yǎng)殖業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此禽致病性大腸桿菌 O1 血清型檢測(cè)具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量 PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增非洲豬瘟病毒，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	禽致病性大腸桿菌 O1 血清型 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	禽致病性大腸桿菌 O1 血清型 PCR 陽性對(duì)照	50 μL（黃蓋）
試劑五	天凈沙核酸釋放劑(試用裝)	20 次（1mL、綠蓋）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌 DNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對(duì)照管	PCR 陽性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μLL
禽致病性大腸桿菌 O1 血清型 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對(duì)照（水）		18 μL
PCR 陽性對(duì)照（禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	94℃	30 sec
	50℃	30 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	5 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。