藍舌病病毒通用RT-PCR試劑盒

Bluetongue Virus(BTV)

產(chǎn)品及特點

藍舌病病毒(Bluetongue Virus，BTV)會引起藍舌病，是反芻動物的一種嚴(yán) 重傳染病。以口腔、鼻腔和胃腸道黏膜發(fā)生潰瘍性炎癥變化為特征，病羊乳房和 蹄部也常出現(xiàn)病變，且常因蹄真皮層遭受侵害而發(fā)生跛行，該病毒主要侵害綿羊， 對養(yǎng)羊業(yè)造成嚴(yán)重損害，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司 基于 RT-PCR 原理開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測藍舌病病毒。 它具有下列特點： 

1. 一站式，用于不需要單獨準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)藍舌病病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品參考國標(biāo) GB/T18636-2017 開發(fā)，只能用于科研，不能用于臨床。 

藍舌病病毒通用RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 藍舌病病毒 PCR 陽 性對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此 為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分 混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水 后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水 作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為: 

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴增產(chǎn)物長度為 273bp。如 果陰性對照有此擴增產(chǎn)物或陽性對照無此擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要 分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產(chǎn)物、陽性對照有此擴增 產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有此擴增產(chǎn)物則為陽性， 如果無則為陰性。