禽波氏桿菌PCR試劑盒

Bacteria

產(chǎn)品及特點(diǎn)

波氏桿菌病是由禽波氏桿菌引起的一種細(xì)菌性傳染病，該病主要造成雞胚 胎死亡。雞波氏桿菌也可造成鴨、鵝等其它禽類發(fā)病，但成年種雞基本無異常 現(xiàn)象，個別出現(xiàn)拉綠便、眼流淚、氣喘等癥狀。但種雞所產(chǎn)種蛋孵化率降低、 死胚增多，死胚多發(fā)生在 18 日齡前后，死胚率一般在 30%-40%，有的高達(dá) 60%。同時，種蛋孵出的弱雛增多，弱雛率在 5%-20%，雛雞多在 3-5 日齡發(fā) 病，表現(xiàn)為呼吸困難，食欲降低或廢絕，精神沉郁，呆立一隅，常急性死亡。 因此快速靈敏檢測禽波氏桿菌具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原 理開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增禽波氏桿菌，與其他微生物沒有交 叉反應(yīng)

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。 

禽波氏桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一 個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。