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            上海信裕生物科技有限公司
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            當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次隱孢子蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒

            隱孢子蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒

            參   考   價: 2490 2290

            訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

            具體成交價以合同協(xié)議為準

            產(chǎn)品型號50次

            品       牌其他品牌

            廠商性質生產(chǎn)商

            所  在  地上海

            更新時間:2020-07-29 17:05:16瀏覽次數(shù):508次

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            供貨周期 一周 規(guī)格 50T
            貨號 XY-0236 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
            主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。
            隱孢子蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

            隱孢子蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒

            Cryptosporidium spp

            產(chǎn)品及特點

            隱孢子蟲(Cryptosporidium)為體積微小的球蟲類寄生蟲,廣泛存在多種脊椎動 物體內(nèi),寄生于人和大多數(shù)哺乳動物的主要為微小隱孢子蟲(C. parvum),引起隱孢子 蟲病(cryptosporidiosis),是一種以腹瀉為主要臨床表現(xiàn)的人畜共患性原蟲病,因此對 隱孢子蟲進行快速靈敏的診斷具有重要的意義。本產(chǎn)品就是根據(jù)隱孢子蟲 rRNA 編碼基 因的保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。本試劑盒具有下列特點: 

            1. 根據(jù)隱孢子蟲 OWP(oocyst wall protein)編碼基因保守序列設計的專一性引物, 與其他腸道疾病病原體 

            2. 靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數(shù)量級,可以達到幾十拷貝/反應。

            3. 即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準確快速。

            4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。

            5. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應體系的熒光定量 PCR。

            6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

            隱孢子蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

             

            編號

            成分

            規(guī)格

            試劑一

            2×PCR MagicMix

            0.5 mL(裝 A 袋) 

            試劑二

            超純水 

            1 mL(裝 A 袋)

            試劑三

            隱孢子蟲 PCR 引物 F 

            0.5 OD(裝 B 袋)

            試劑四

            隱孢子蟲 PCR 引物 R

            0.5 OD(裝 B 袋)

            試劑五 隱孢子蟲基因陽性對照 (1×10E8 copy/μL) 50 μL(裝 C 袋) 

            試劑六

            使用手冊

            1 份

            運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準備區(qū)、C 袋的陽性對照分開放置),有效期 一年。 

            自備試劑  DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。

            使用方法 一、樣品 DNA 的制備

            1. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)原蟲 DNA 提取試劑盒兼 容。本公司的柱式糞便 DNA 提取試劑盒也可以用于隱孢子蟲 DNA 提取。 二、引物的制備(在樣品制備室進行)

            2. 按引物標簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水(加入量見引物試管上 的標簽),使得兩條引物的濃度均為 10μM(10pmol/μL),然后各取 110μL 混 合在一起得 220μL,標注為引物混合物,放冰上待用。220μL 足夠 100 次 qPCR 反應。

            三、稀釋陽性對照

            (以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高, 因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照, 只提供可以直接使用的長為 150bp 的 DNA 段作為陽性對照。

            3. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

            4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。

            5. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

            6. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

            7. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

            8. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得 1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

            9. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

            三、設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行) 10. 在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管 和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲存好后后加): 

            成分

            樣品管 N+2 個

            PCR 陰性 對照管

            標準曲線 樣品管(2-7 管)

            2×qPCR MagicMix

            10 μL

            10 μL

            各 10 μL

            引物混合物

            2 μL

            2 μL

            各 2 μL

            自備 10×ROX (見注)

            2 μL

            2 μL

             2 μL

            待測樣品 DNA 模板 

            1-5 μL

             

             

            陽性對照(2-7 號)    各 5μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…) 

            補水到 

            20 μL  

            20 μL  

            20 μL 

            11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。

            過程

            溫度

            時間

            預變性

            95℃

            3 分鐘

             

            PCR 反應 (45 個循環(huán))

            95℃

            30 秒 

            55℃ 30 秒 

            72℃

            30 秒 

            12. 數(shù)據(jù)采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進行。一般在復性步驟采集熒光數(shù)據(jù)。本產(chǎn)品中所 含的熒光染料在不結合 DNA 時,大吸收光譜在 471 nm,結合 DNA 時的大 吸收光譜在 500 nm,大發(fā)射光譜在 530 nm。

            四、數(shù)據(jù)處理

            13. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品 的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。 

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