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人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用

試驗原理：

PⅢNP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知PⅢNP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將PⅢNP和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PⅢNP的活性濃度呈比例關(guān)系。

人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒操作注意事項

1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．  底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒試劑的準備

1．  標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3．  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

4.局限性：6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。

結(jié)果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的PⅢNP標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的PⅢNP含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/mlxyA492Ra 【中文名稱】：大鼠角蛋白1(KRT1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Keratin 1 (KRT1)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyC284Ra 【中文名稱】：大鼠α白蛋白(AFM)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Afamin (AFM)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyH019Ra 【中文名稱】：大鼠轉(zhuǎn)酮醇酶(TKT)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for TransketolaHZ (TKT)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyD466Ra 【中文名稱】：大鼠低氧誘導因子2α(HIF2α)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Hypoxia Inducible Factor 2 Alpha (HIF2a)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyC608Ra 【中文名稱】：大鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Xanthine DehydrogenaHZ (XDH)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyF665Ra 【中文名稱】：大鼠核因子I/X(NFIX)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Nuclear Factor I/X (NFIX)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyH446Ra 【中文名稱】：大鼠配對框基因6(PAX6)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Paired Box Gene 6 (PAX6)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyS762Ra 【中文名稱】：大鼠胰島素受體底物3(IRS3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Insulin ReHZptor Substrate 3 (IRS3)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyC551Ra 【中文名稱】：大鼠Janus激酶1(JAK1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Janus KinaHZ 1 (JAK1)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyD880Ra 【中文名稱】：大鼠胰島素受體底物2(IRS2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Insulin ReHZptor Substrate 2 (IRS2)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyQ090Ra 【中文名稱】：大鼠細胞色素P450家族成員2C9(CYP2C9)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyQ092Ra 【中文名稱】：大鼠細胞色素P450家族成員2C19(CYP2C19)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Cytochrome P450 2C19 (CYP2C19)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyD302Ra 【中文名稱】：大鼠細胞色素P450家族成員2D6(CYP2D6)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Cytochrome P450 2D6 (CYP2D6)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyG192Ra 【中文名稱】：大鼠N-乙酰轉(zhuǎn)移酶2(NAT2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for N-AHZtyltransferaHZ 2 (NAT2)  【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA439Ra 【中文名稱】：大鼠蛋白激酶Cε(PKCε)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Protein KinaHZ C Epsilon (PKHZ)  【靈敏度】：9.375pg/mL