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            富士膠片和光(廣州)貿易有限公司>供求商機>新型親和法外泌體提取試劑盒
            新型親和法外泌體提取試劑盒
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            • 新型親和法外泌體提取試劑盒

            舉報
            貨物所在地: 國外
            地: 日本
            更新時間: 2025-02-10 10:17:53
            期: 2025年2月10日--2026年3月22日
            已獲點擊: 1123
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            (聯(lián)系我們,請說明是在 化工儀器網 上看到的信息,謝謝?。?/p>

            產品簡介

            詳細介紹

            2514694138412242.jpg新型親和法外泌體提取試劑盒

            MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS

             

              MagCapture™ 外泌體提取試劑盒 PS采用磷酯酰絲氨酸(PS)親和Tim4蛋白固化磁珠(PS親和法)的方法可以簡便快捷地提取高純度的完整外泌體和其他細胞外囊泡(EVs)。如果想要得到更高純度的外泌體,請使用10,000×g離心后的上清。

              該試劑盒使用含有EDTA的中性洗脫緩沖液將外泌體完整洗脫下來,所提取的完整外泌體和其他EVs可用于不同實驗,包括電鏡分析(TEM)、納米粒子追蹤(NTA)分析、投喂實驗、分子組成(蛋白質、脂質、核酸等)分析等。

             

            ◆膜表面磷酯酰絲氨酸(PS)親和法

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              Tim4蛋白固化磁珠,在金屬離子存在的條件下親和細胞外囊泡表面的磷酯酰絲氨酸(PS),然后使用含有EDTA的洗脫液進行洗脫,捕獲高純度的完整細胞外囊泡

             

            ◆優(yōu)點?特色

             nezumi-1[1]-cn.jpg

            使用新型親和提取方法

            ● 通過PS親和分子回收

            ● 低背景值

            ● 在中性條件下通過螯合試劑進行溫和洗脫

            ※ 可獲得高純度,完整的外泌體

            捕獲.JPG

             

            無需進行超離

            ● 使用磁珠改進了操作

            ● 流程優(yōu)化

            ※ 高重復性

            2014532734317504.gif

             

            與其他提取方法相比

            方法

            外囊泡純度

            囊泡狀態(tài)

            可操作性

            回收量

            PS親和法

            ■■■

            完整

            簡便穩(wěn)定

            ■■■

            超速離心法

            ■■

            完整

            簡便

            ■■

            聚合物沉淀法

            完整

            簡便快捷

            ■■■■

            密度梯度離心法

            ■■■■

            完整

            復雜

            ■■

            抗體親和法

            ■■■

            不完整

            簡便穩(wěn)定

            ■■

            樣品類型:細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿、尿液等。

             

            ● 可以純化高純度完整的細胞外囊泡

            ● 可以從細胞上清液、血清、血漿和尿液中純化外囊泡

            ● 重復性高,回收量穩(wěn)定

            ● 簡易操作(約3.5小時)

            ● 啟用多個樣品(無需超速離心)

             

            ◆試劑盒組成

            產品名稱

            包裝規(guī)格

            保存條件

            MagCapture™
            Exosome Isolation Kit PS

            10次

            (產品編號:293-77601)

            2次

            (產品編號:299-77603)

            2-10°C

            試劑盒成分

            (1) 鏈霉親和素磁珠
            (2)生物素標記的外泌體捕獲
            (3)外泌體捕獲免疫固定緩沖液
            (4)外泌體結合增強劑(×500)
            (5)洗滌緩沖液
            (6)外泌體洗脫緩沖液
            (7)反應管

            <10 次>
             600 μL×1 管
             100 μL×1 管
             35 mL×1 瓶
             500 μL×1 管
             75 mL×2 瓶
             5 mL×1 瓶
             22 管

            <2 次>
             120 μL×1 管
             20 μL×1 管
             7 mL×1 瓶
             100 μL×1 管
             30 mL×2 瓶
             1 mL×1 瓶
             1 管

            *每套試劑盒能完成5次回收實驗,即實際使用量為10×5次/Kit與2×5次/Kit

             

            案例•應用

            從血清、血漿、尿液中提取的細胞外囊泡的分析

            從人血清中提取外泌體的產量比較

              使用該試劑盒,超離法和抗體親和法提取人血清的外泌體,接著用CD9和CD63抗體進行免疫印跡實驗。

             

            2.png

            ● 檢測抗體

                  抗CD9兔多抗,System Bioscience公司

                  抗CD63兔多抗,System Bioscience公司

            ● 免疫印跡(WB)數(shù)據(jù)

                  各樣品結果相當于150 μL的血清樣本。從100 μL提取物中取出15 μL,添加5 μL的4×SDS樣品緩沖液,全部上樣。

             

            從人EDTA血漿中提取外泌體

              分別從1 mL的EDTA血漿、EDTA血漿(超濾更換緩沖液)、人血清中提取外泌體,進行WB檢測(抗Flotillin2抗體)。

             

            3.png

            ● 檢測抗體

                  抗Flotillin-2小鼠單抗(29/Fotillin-2),BD Bioscience公司

            ● 使用樣品量

                  各1 mL

            ● 免疫印跡(WB)數(shù)據(jù)

                  各樣品結果分別對應150 μL樣品量。從100 μL提取物中取出15 μL,添加5 μL的 4×SDS樣品緩沖液,全部上樣。

             

            從人尿液中提取外泌體的回收量比較

              1 mL人尿液分別通過本試劑盒、聚合物沉淀法、超離法進行外泌體回收,并做免疫印跡(WB)檢測(抗CD9抗體)。

             

            4.png

            ● 檢測抗體

                  抗CD9兔多抗,System Biosciences公司

            ● 使用樣品量

                  各1 mL

            ● 免疫印跡(WB)數(shù)據(jù)

                  各樣品結果分別對應150 μL尿液樣品。從100 μL提取物中取出15 μL,加入5 μL的 4×SDS樣品緩沖液,全部上樣。

             

            ◆與傳統(tǒng)沉淀法的功能比較實驗

              分別用本試劑盒、超離心法和聚合物沉淀法從K562(人慢性骨髓性白血?。┘毎囵B(yǎng)上清(無血清培養(yǎng)上清或10%Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基)提取外泌體,分別比較三種方法的外泌體回收量和外泌體純度。

             

            MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS【PS親和法】

              按照試劑盒的操作說明(反應時間:3小時),從1 mL經過離心處理(10,000×g,30min)的K562細胞培養(yǎng)上清(無血清培養(yǎng)基或10% Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基※1)中提取外泌體。

             

            超速離心法

              將10 mL經過離心處理(10,000×g,30 min)的K562細胞培養(yǎng)上清(無血清培養(yǎng)基或10% Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基※1)進行超離(110,000×g,70 min),用TBS緩沖液重懸沉淀物后,再進行超離(110,000×g,70 min),回收沉淀部分。

             

            聚合物沉淀法

              從1 mL經過離心處理(10,000×g,30 min)的K562細胞培養(yǎng)上清(無血清培養(yǎng)基或10% Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基※1)中,按照市售的A公司產品的操作說明(靜置時間:過夜)提取外泌體。

            ※1:110,000×g離心2小時,在不吸到沉淀的前提下回收上清。

             

            比較提取的外泌體的透射電子顯微鏡(TEM)分析結果和納米粒子追蹤(NTA)分析結果

              分別用本試劑盒、超離法、聚合物沉淀法提取外泌體,用NanoSight LM10檢測外泌體片段的粒子直徑。另外,用終濃度為2%的多聚甲醛固定提取到的外泌體片段(2~4×1010 particles),在透射電子顯微鏡進行分析。

             

            5.png

            電子顯微鏡圖像 數(shù)據(jù)提供:金澤大學 醫(yī)學系 華山教授、大阪大學 iFReC 中井先生

             

            MagCapture™ 可提取到很多100 nm左右的粒子,在透射電子顯微鏡中也可以確認到很多細胞外囊泡。

             

            K562細胞培養(yǎng)上清提取的外泌體回收量和純度的比較(無血清培養(yǎng)基)

              用PS親和法、超離法和聚合物沉淀法從K562 細胞培養(yǎng)上清(無血清培養(yǎng)基)獲得樣品進行電泳。接著用銀染色和WB法(CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗體)進行實驗。

             

            6.jpg

            6.5.jpg

            回收量,不是回收率

            ● 檢測抗體

                 抗CD63小鼠單抗(MEM-259)

                 抗Flotillin-2 小鼠單抗  (29/Flotillin-2),BD Bioscience公司

                 抗Lamp-1小鼠單抗 (25/Lamp-1),BD Bioscience公司

             

            K562細胞培養(yǎng)上清提取外泌體的回收量和純度的比較(10%FBS-添加培養(yǎng)基)

              用MagCapture™ 外泌體提取試劑盒 、超離法和聚合物沉淀法,從K562 細胞培養(yǎng)上清(10% 去外泌體 FBS補充培養(yǎng)基)獲得樣品進行電泳,用銀染法和WB法(CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗體)進行實驗。同時,對外泌體提取片段進行質譜測定,比較所有測定的多肽中來自K562細胞的人來源多肽的比例(由于添加到細胞培養(yǎng)基的FBS中牛蛋白聚集體是混雜的,所以人來源多肽的比率會下降)。

             

            7.png

            ● 檢測抗體

                 抗CD63小鼠單抗(MEM-259)

                 抗Flotillin-2小鼠單抗 (29/Flotillin-2),BD Bioscience公司

                 抗Lamp-1小鼠單抗(25/Lamp-1),BD Bioscience公司

                 健康人血清來源的外泌體中提取miRNA和mRNA的回收量比較

             

            實驗數(shù)據(jù)

            ①運用不同方法提取外泌體并比較從中提取的microRNA和mRNA的回收量

            通過超離法和PS親和法將EVs從正常人血清中分離,然后使用microRNA提取試劑盒(產品編號295-71701)提取RNA。通過qRT-PCR分析提取的RNA,并比較microRNA (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)、mRNA (GAPDH, PIK3CB)的Ct值。

             

            8.png

            相比超離法,PS親和法提取所得EVs中的microRNA和mRNA得到更高產量。

             

            ②運用不同的RNA提取方法提取microRNA和mRNA的回收量比較

              運用PS親和法將EVs從正常人血清中分離,然后使用microRNA提取試劑盒(產品編號295-71701)或基于AGPC法的試劑提取RNA。通過qRT-PCR分析提取的RNA,并比較microRNA (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)、mRNA (GAPDH, PIK3CB)的Ct值。

             

            9.png

            對比AGPC法,使用microRNA提取試劑盒更能有效提取PS親和法純化所得EVs中的microRNA和mRNA

             

            ◆外泌體蛋白質組學分析

            <實驗內容及結果>

              分別利用PS親和法、超離法、聚合物沉淀法,從含10% FBS(不含外泌體)的K562細胞培養(yǎng)上清液中提取外泌體。將提取樣品用10%聚丙烯酰胺電泳分離,剪切出全部的蛋白質條帶。然后在凝膠內進行消化,用LC-MS對蛋白質進行檢測。對上述三種方法提取的外泌體進行蛋白質組合的相關性比較。

            比較通過MASS分析鑒定的*個蛋白質

            白色柱:源自外囊泡的人類蛋白質

            灰色柱:來自FBS的牛蛋白污染物

            紅色:來自外囊泡的標記蛋白

            樣品:K562細胞培養(yǎng)基(含有10%去除外泌體胎牛血清)

             

             

            PS親和法

            超離法

            聚合物沉淀法

            1

            71 kDa熱休克同源蛋白

            DNA依賴蛋白激酶催化亞基基因

            補體C3

            2

            膜聯(lián)蛋白A6

            鐵轉蛋白受體1

            α2-巨球蛋

            3

            鐵轉蛋白受體1

            血清白蛋白

            纖連蛋白

            4

            V-ATP酶A亞基

            ATP依賴RNA解旋酶

            血清白蛋白

            5

            浮艦蛋白-2

            微管蛋白β5

            血小板反應蛋白-1

            6

            程序性細胞死亡6互作蛋白

            71 kDa熱休克同源蛋白

            補體C4

            7

            細胞表面抗原4F2重鏈

            脂肪酸合成酶

            α-1抗蛋白酶

            8

            膜聯(lián)蛋白A1

            細胞表面抗原4F2重鏈

            載脂蛋白-β-100

            9

            220kDa激酶D相互作用底物

            U5小核核糖核蛋白的解旋酶

            胎兒血紅蛋白亞單位

            10

            膜聯(lián)蛋白A2

            β4微管蛋白

            β5微管蛋白

            10.5.png

            成對組合相關性比較

            10.png

             

            應用數(shù)據(jù)

            11.png

             

            Protein Assay BCA Kit檢測外泌體的蛋白質濃度

              Protein Assay BCA Kit是利用二辛可寧酸(BCA)定量檢測溶液中的蛋白質濃度的試劑盒,是蛋白質定量檢測法中的方法。其原理為,堿性條件下的蛋白質Cu2+ 離子被還原為Cu+。Cu+與BCA形成絡合物,即產生紫色螯合物,蛋白質濃度與紫色螯合物顏色深淺有關,通過測定562 nm處的吸光度,并與標準曲線做比照,即可定量溶液中的蛋白質濃度。

            利用MagCapture™外泌體提取試劑盒從細胞培養(yǎng)上清液中提取外泌體,通過Protein Assay BCA Kit高靈敏的檢測外泌體中蛋白質濃度。

             

            【實驗內容及結果】

              將通過MagCapture™ 外泌體提取試劑盒提取的25 μL外泌體溶液分注于96孔板中,加入 Protein Assay BCA Kit中試劑A和試劑B混合液200 μL。之后60℃孵育30分鐘,檢測560 nm吸光度(圖1)。結果表明,通過Protein Assay BCA Kit的高靈敏度檢測,可測定提取后外泌體中蛋白質濃度。

             

            12.png

            圖1. Protein Assay BCA Kit 檢測BSA的檢量線和提取的外泌體蛋白質濃度的檢測

             

            <BCA Assay 操作概要>

            由于外泌體蛋白質濃度相當?shù)?,因此BCA測定時不要稀釋樣品。

            ① 將BSA標準溶液按照250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL和空白對照,分別每孔25 μL加到96孔板中。

            ②    分別把提取的外泌體和洗脫緩沖液(空白)按照每孔25 μL加入96孔板。

            ③    把200μL Protein Assay BCA Kit(產品編號:297-73101)的試劑A盒試劑B混合液(A:B=50:1)加入放有樣品的孔板中。

            ④    60℃孵育30分鐘

            ⑤    室溫條件下降低孔板溫度

            ⑥    測定560 nm的吸光度

             

            產品編號

            產品名稱

            包裝

            297-73101

            蛋白測定試劑盒(二喹啉甲酸)

            250次用

            015-25613

            2 mg/mL 牛血清蛋白溶液

            1 mL×10

             

            ◆外泌體的標記和Hela細胞導入實驗

            【實驗概要】

            用PKH67(Sigma公司)標記MagCapture™ 外泌體提取試劑盒提取的細胞外囊泡, Hela細胞導入確認

             

            <外泌體PKH67標記>

            1. MagCapture™ 外泌體提取試劑盒提取外泌體(實驗當天從K562細胞培養(yǎng)上清液提取外泌體)

            2. 用BCA Assay和NanoSight檢測樣品的蛋白質濃度和粒子濃度

            3. 將相當于5 μg*蛋白量的外泌體樣品溶液分裝至1.5 mL管中。

            *請配制合適的使用量

            4. 將2.0 μL的PKH linker溶解在0.25 mL的DiluentC中。…4×Dye solution*

            *請配制合適的使用量

            5. 添加1/3樣品量的4×Dye solution至樣品中,混合后在室溫中孵育5-10分鐘。

            6. 根據(jù)附帶的操作說明用PBS平衡Exosome Spin Columns (MW 3000)(Thermo公司)。

            7. 將100 μL樣品分別加入上述平衡后的旋轉柱*中,離心(大添加量:100 μL)。

            *準備必需的支數(shù)。

            8. 將外泌體溶液*加入到已經接種好Hela細胞的培養(yǎng)皿中,24小時后用顯微鏡觀察并利用流式細胞儀進行分析。

            *根據(jù)實驗調節(jié)外泌體添加量

             

            13.png

            圖1. PKH標記外泌體的細胞捕獲觀察

             

            從16 mL K562培養(yǎng)上清液中超濾濃縮得到4 mL培養(yǎng)上清液作為樣品,通過PS親和法提取外泌體。

            ● 提取的外泌體蛋白質濃度:22.3 ng/μL

            ● 粒子濃度:1.2×108 particles/mL

            將上述標記的外泌體溶液全部加入接種好的Hela細胞中,24小時后用熒光顯微鏡(左)和流式細胞儀(右)檢測捕獲情況。

            Opti-MEM:取相同量用PKH標記后添加到細胞中作為陰性對照。

            14.png

             

            ◆細胞培養(yǎng)上清•血清•血漿的預處理操作

              樣品預處理:對樣品進行1,200×g離心操作※1。如果要得到更高純度的外泌體,則按照下述步驟對樣品進行10,000×g離心操作※2。

              下文是細胞培養(yǎng)上清、血清/血漿的預處理方法。其他體液樣品的預處理操作,請參考血清/血漿的實驗步驟,做適當調整。

             

            1815240233299959.png

             

            更換緩沖液(限制過濾)操作

            用50 mL TBS 緩沖液對1 mL 已經經過離心處理的EDTA 血漿樣品進行緩沖液更換。

            1. 把19 mL TBS 加進VivaSpin20(100K)中。

            2. 把1 mL 離心過的EDTA 血漿上清添加在第1. 的VivaSpin20(100K)中,混勻。

            3. 把第2. 的VivaSpin20(100K)在4℃下進行離心處理。

            4. 減少上線的液體后,在VivaSpin20(100K)中追加10 mL TBS 緩沖液。

            5. 4℃下離心處理。

            6. 減少上面的液體后,在VivaSpin20(100K)中追加10 mL TBS 緩沖液。

            7. 4℃下離心處理。

            8. 減少上面的液體后,在VivaSpin20(100K)中追加11 mL TBS 緩沖液。

            9. 4℃下離心處理直至樣品液量達到1 mL 以下。

            10. 進行提取。

             

            ◆MagCapture™ 外泌體提取試劑盒 操作步驟

            16.png

             

            ◆產品列表

            產品編號產品名稱包裝
            293-77601Exosome外泌體提取試劑盒PS 10次用
            299-776032次用

             

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