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ES細(xì)胞?iPS細(xì)胞培養(yǎng)用血清代替品

　　本產(chǎn)品是ES細(xì)胞和iPS細(xì)胞培養(yǎng)中使用的血清代替品。血清含有分化誘導(dǎo)因子，會(huì)導(dǎo)致干細(xì)胞分化。使用本產(chǎn)品代替血清，可在ES和iPS細(xì)胞培養(yǎng)的同時(shí)，保持他們的未分化狀態(tài)，達(dá)到穩(wěn)定培養(yǎng)。
　　本產(chǎn)品不含劇毒物質(zhì)，將其作為普通物質(zhì)處理。
　　使用本產(chǎn)品配制培養(yǎng)基培養(yǎng)的小鼠ES細(xì)胞，可用于制備嵌合體小鼠，并確認(rèn)其種系傳遞。

◆特點(diǎn)•優(yōu)勢

●　可用于嵌合體小鼠制備，并確認(rèn)其種系傳遞。

●　作為血清替代品，用于小鼠ES細(xì)胞?人IPS細(xì)胞培養(yǎng)。

●　不含劇毒物質(zhì)。

◆案例•應(yīng)用

1、嵌合體小鼠的制備與種系傳遞

　　將組裝HaloTag^® cDNA的目標(biāo)載體導(dǎo)入小鼠ES細(xì)胞，用含有StemSure^® Serum Replacement（SSR）的培養(yǎng)基培養(yǎng)。確認(rèn)載體導(dǎo)入小鼠ES細(xì)胞后，將其注入至ICR小鼠的胚盤胞，并移植至ICR小鼠的子宮。得到的嵌合體小鼠與C57BL/6J小鼠交配，獲得F1小鼠。

(1) 　嵌合體小鼠

　　收集嵌合體小鼠的血液，用TRITC（四甲基若丹明異硫氰酸鹽）對HaloTag^® 蛋白質(zhì)染色。發(fā)現(xiàn)小鼠ES細(xì)胞源的HaloTag^® 的血液被染色，可確認(rèn)為嵌合化。

(2)　F1小鼠

　　F1小鼠的血液發(fā)現(xiàn)HaloTag^® 存在，可確認(rèn)用SSR培養(yǎng)基培養(yǎng)的ES細(xì)胞嵌合小鼠能夠正常存活。

2、人iPS細(xì)胞201B7的培養(yǎng)

(1)　克隆形態(tài)與ALP染色 

　　已確認(rèn)可用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培養(yǎng)人iPS細(xì)胞201B7株。ALP染色呈陽性。

<培養(yǎng)基組成>
D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5 ng/mL bFGF

(2)　未分化標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)

　　使用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞201B7株，確認(rèn)各種未分化標(biāo)記（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈陽性。

3、小鼠ES細(xì)胞D3的培養(yǎng)

(1)　細(xì)胞形態(tài)與ALP染色

　　使用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培養(yǎng)小鼠ES細(xì)胞D3，能觀察到小鼠ES細(xì)胞群*的光澤，ALP染色呈陽性。

(2)　細(xì)胞增殖曲線

　　用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠ES細(xì)胞D3進(jìn)行14繼代培養(yǎng)，比較細(xì)胞增殖。

　　如下圖所示StemSure^® 系列與A公司有同等的性能。

< StemSure^® 系列培養(yǎng)基組成>
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

（使用膠原包被的12孔板）

(3)　細(xì)胞群倍加數(shù)*

　　使用不同培養(yǎng)基對小鼠ES細(xì)胞D3進(jìn)行繼代培養(yǎng)，檢查培養(yǎng)天數(shù)與細(xì)胞群倍加數(shù)的關(guān)系。

　　下圖顯示StemSure^® 系列與A公司產(chǎn)品的細(xì)胞群倍加數(shù)相同。

　　*細(xì)胞群倍加數(shù) cell population doubling level，縮寫PDL，指從培養(yǎng)開始至現(xiàn)在細(xì)胞群的倍增次數(shù)。

<培養(yǎng)基組成>

StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/ml StemSure^® LIF

（使用膠原包被的12孔板）

(4)　未分化標(biāo)記的檢測

　　使用StemSure^® 系列對小鼠ES細(xì)胞D3進(jìn)行5代繼代培養(yǎng)，各種未分化標(biāo)記（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈陽性。

<培養(yǎng)基組成>
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

4、畸形瘤的形成

　　用StemSure^® 系列對小鼠ES細(xì)胞D3進(jìn)行繼代培養(yǎng)。對免疫不全小鼠的皮下注射培養(yǎng)后細(xì)胞。在形成皮下畸形瘤，其內(nèi)部檢測出神經(jīng)組織（外胚葉源）、軟骨組織（中胚葉源）、管腔結(jié)構(gòu)纖毛上皮（內(nèi)胚葉源）。

<培養(yǎng)基組成 >
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

◆產(chǎn)品列表

ES細(xì)胞?iPS細(xì)胞培養(yǎng)用血清代替品