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BINKIT^® NK細胞擴增套裝（外周血單核細胞來源）

◆原理

　　BINKIT^® 可從外周血單核細胞擴增高活性的自然殺傷（NK）細胞。

◆優(yōu)點?特色

●無需飼養(yǎng)層細胞，即可從外周血細胞 (PBMCs)中擴增NK細胞

●3周時間內(nèi)NK細胞的數(shù)目可擴增幾百到幾千倍

●NK細胞將獲得增強的細胞殺傷性

●該試劑盒適合20~50 mL的外周血細胞

●Xeno-free（不含動物來源的材料）

◆案例?應用

<試劑盒組成>

●NK 細胞初始培養(yǎng)基

●NK細胞初始培養(yǎng)瓶

●NK細胞傳代培養(yǎng)基

●BINKIT^® 明細表(PDF格式)

<未提供材料>

●Ficoll 淋巴細胞分層液（GE Healthcare）

●無菌PBS

●FBS或自體血漿（56℃加熱30分鐘以滅活）

<結果>

圖 1 使用BINKIT^® 進行體外NK細胞擴增

利用BINKIT^® 對外周血單核細胞進行NK細胞擴增，CD3-CD56+細胞從15.8％增加到88.6％。

圖 2 使用BINKIT^® 進行體外NK細胞擴增

利用BINKIT^® 對外周血單核細胞（來自健康自愿者，HD, n=3）進行NK細胞擴增。

細胞計數(shù)（左）和倍率的變化（右）表明NK細胞體在外高效擴增。

圖3  使用BINKIT^® 進行體外NK細胞擴增

分別以BINKIT擴增的NK細胞（實線）和從3名志愿者新鮮分離的NK細胞（虛線）來檢測NK細胞對K562細胞的殺傷性。

結果表明，擴增后的NK細胞對K562細胞殺傷性顯著增強（P<0.01）。

<培養(yǎng)步驟>

(1) 準備試劑

在NK細胞初始培養(yǎng)基和NK細胞傳代培養(yǎng)基中，加入5% (v/v) 的熱滅活FBS或自體血漿。

(2) 制備外周血單核細胞（PBMCs）

通過Ficoll密度梯度離心，從人全血中分離外周血單核細胞。

(3)清洗NK細胞初始培養(yǎng)瓶

加入10 mLPBS至NK細胞初始培養(yǎng)瓶。傾斜培養(yǎng)瓶使PBS覆蓋整個表面。

將培養(yǎng)瓶中液體全部倒出，小心以免刮傷培養(yǎng)瓶的表面。重復洗滌過程兩次。

(4)從PBMCs中培養(yǎng)NK細胞

將1×10⁶ cells/mL 的PBMCs 懸浮于NK細胞初始培養(yǎng)基中。每1 mL 細胞懸浮液加入40 μL的NK細胞初始混合物。

細胞懸液轉移至預洗滌的NK細胞初始培養(yǎng)瓶，在37℃，5％的CO₂培養(yǎng)3天。

(5)更換培養(yǎng)基及傳代

同貼壁細胞處理一樣，轉移時置于錐形離心管，200×g離心8分鐘。

去除上清，將1×10⁶ cells/mL 的NK細胞懸浮于傳代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基內(nèi)加入5 mL

轉移后的懸浮細胞置于常規(guī)培養(yǎng)瓶中，在37℃，5％ CO₂條件下培養(yǎng)。

每2-3天將 0.8×10⁶ cells/mL 細胞置于*NK細胞傳代培養(yǎng)基中，進行傳代培養(yǎng)。

<建議培養(yǎng)期>

2-3 周

注意：試劑僅供科研使用，不可用于臨床。 

BINKIT^® NK細胞擴增套裝（外周血單核細胞來源）