化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
蛋白聚集小體檢測
ProteoStat® Aggresome detection kit
◆原理
聚集小體（Aggresome）是由一群不正常堆疊在一起的蛋白質(zhì)所形成的包涵體（Inclusion Bodies）。聚集小體的出現(xiàn)往往也表明細胞正處于某種應(yīng)激狀態(tài)，比如高溫、病毒感染、活性氧自由基攻擊等。聚集體通過隔離毒性，聚集蛋白質(zhì)，還可以通過自噬促進細胞代謝。提供細胞保護功能。
研究人員人文與人類疾病相關(guān)的某些細胞包涵體來自于聚集小體的反應(yīng)，包括與阿爾茨海默氏病相關(guān)的細胞內(nèi)外的聚集小體、與帕金森氏病的神經(jīng)元相關(guān)的路易體、與酒精性肝病的干細胞相關(guān)的馬洛里小體、與肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS）的星形膠質(zhì)細胞相關(guān)透明包涵體。PROTEOSTAT® 聚集小體檢測試劑盒提供了一種快速、特異、定量的方法來識別一個真正的細胞環(huán)境相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病抑制劑。該固定的細胞檢測不需要具備生理活性的蛋白突變體或基因工程的細胞株。PROTEOSTAT® 染料已經(jīng)在廣泛的條件下驗證，與小分子調(diào)節(jié)劑一起使用，適用于具有治療價值的化學(xué)物的篩選。優(yōu)化抗體共定位研究，確定聚集蛋白物質(zhì)、自噬細胞和聚集小體的形成中涉及各種蛋白之間的相互作用。
◆試劑盒組成
試劑 | 包裝 |
ProteoStar™ Aggresome Detection Reagent | 10 μL |
Hoechst 33342 Nuclear Stain | 50 μL |
Proteasome Inhibitor (MG-132) | 120 nM |
10X Assay Buffer | 25 mL |
◆優(yōu)點?特色
1、特點
● 可靠、簡便、準(zhǔn)確的檢測細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)聚集反應(yīng)。
● 采取了細胞固定檢測方法，該方法是抗體共定位研究的優(yōu)選方法。
● 可用于流式細胞實驗。
● 基于細胞的靈敏的藥物反應(yīng)分析方法。
● 不需分離目的的蛋白或稀釋樣品與常規(guī)緩沖液兼容
● 在熒光微孔板中即可進行簡單、靈敏、均一地檢測
● 可與其他檢測手段聯(lián)用，獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果
● 可檢測不同蛋白的聚集
● 可檢測蛋白多肽聚集程度，可用于篩選蛋白
● 與傳統(tǒng)蛋白聚集檢測染料相比更靈敏，信號更明亮
● 聚集激活劑或抑制劑
● 在寬pH（4-10）和寬離子強度范圍都可使用
2、優(yōu)點
● 檢測樣品不需要具備生理活性的蛋白突變體或基因工程的細胞株。
● 能夠識別在聚集小體形成時聚集的蛋白和與其相關(guān)聯(lián)的蛋白的相互作用。
● 適用于具有治療價值的化學(xué)物的篩選。
● *實現(xiàn)了聚集小體積累的簡易定量分析。
● 有助于在細胞環(huán)境中檢測神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的聚集抑制劑。
◆案例?應(yīng)用 本產(chǎn)品試用的樣品請看相關(guān)資料！
● 使用例 1：流式細胞術(shù)檢測聚集小體
| 大動肝 |
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| 用0.2% DMSO模擬培育Jurkat細胞或在37℃下用5 µM的MG-132過夜培育。然后，用proteostat® 染料孵育和固定細胞，不需清洗然后直接通過流式細胞儀，在FL3信道使用488 nm的激光進行分析。在MG-132處理的細胞時，紅色熒光信號增加了約3倍。上述的操作會影響蛋白質(zhì)聚集小體的檢測。 | 用0.2% DMSO模擬培育Jurkat細胞或在37℃下用 5 µM的MG-132過夜培育。用熒光素p62 Ab (1:500稀釋原液)培育細胞。清洗細胞后，通過流式細胞儀在FL1信道使用488 nm的激光進行分析。在MG132處理的細胞時，熒光素p62 Ab的抗體信號增加約2.5倍。 |
● 使用例 2：ProteoStat™ 染料與熒光染料的應(yīng)用
用5 μM MG-132培育帶有HeLa細胞的聚集小體12小時后（右圖），加入ProteoStat® 聚集小體染料（紅色）和用Hoechst33342復(fù)染，然后進行觀察。未經(jīng)培育的聚集小體（左圖）。 |
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預(yù)先用5μMMG-132培育帶有HeLa細胞的聚集小體12小時后，用ProteoStat® 聚集小體染料來染色觀察（左上圖綠色部分）；與AlexaFluor® 647微管蛋白抗體（左下圖紅色部分）共定位；通過熒光顯微鏡觀察的合成圖像（右圖）。 |
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| 預(yù)先用5μMMG-132培育帶有HeLa細胞的聚集小體12小時，用ProteoStat® 聚集體小染料來染色觀察（左上圖），與熒光素p62的抗體（右上圖）共定位，通過熒光顯微鏡觀察的合成圖像（下圖）。 |
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● 使用例 3
不同攪拌速率對蛋白聚集的影響使用本產(chǎn)品檢測后，可知攪拌速度越快，蛋白聚集程度越大
● 使用例 4
蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集藍色曲線為對照，沒有攪拌；在攪拌速度在300 rpm下， 綠色曲線與紅色曲線分別表示蛋氨酸被氧化后的蛋白聚集情況。使用本產(chǎn)品檢測后，可知蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集。
● 使用例 5
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α-syn混合物形式聚集在被內(nèi)化到M17神經(jīng)母細胞瘤細胞系的細胞質(zhì)膜。用α-syn單體處理M17細胞，聲波處理α-SIGN PFFs或α-SYN混合物（M + F）。四天后，在固定M17細胞前，將其清洗3次，用 PROTEOSTAT® 聚合染料（綠色）染色和用抗α-syn（紅）和β連環(huán)蛋白（灰色）免疫染色。比例尺= 20 µm。作者提到“Fibril生長和播種量α-synuclein蛋白介導(dǎo)的細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。” |
● 使用例 6
在PROTEOSTAT® 聚集小體檢測試劑（A）和Hoechst 33342核染色（B）的激發(fā)和發(fā)射光譜。 |
● 使用例 7
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由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的自噬細胞產(chǎn)生的聚集小體和聚集小體類的包涵體，epi-熒光顯微成像圖。未經(jīng)處理的K562細胞（A）；加入5 mM MG-132溶液培育24小時（B）；加入50 mM CQ培育24小時（C）；加入100 nM毒胡蘿卜素（D）。在溫室下，用PROTEOSTAT® 染料(1:10,000稀釋)來固定染色細胞30分鐘。PROTEOSTAT® 的著色顯示 聚集體 和 ALIS呈紅色， DAPI 呈藍色。 |
● 使用例 8 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的細胞自噬產(chǎn)生蛋白聚集小體進行流式細胞儀分析
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分別25，50，75 mmCQ，100 nM的毒胡蘿卜素（TG）或5mM的MG-132處理K562細胞24小時。然后在溫室下用PROTEOSTAT® 染料（1：10,000稀釋）固定并透化培育細胞30分鐘。接著在BD LSR II的藍色610/20 nm的信道分析細胞（30,000）。 |
● 使用例 9
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分別使用毒胡蘿卜素（Tg，0.1 μM），25，50和75微米氯喹（CQ）處理K562 細胞24小時，來誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和不*自噬細胞。采用陽性對照，加入蛋白酶體抑制劑，鎂 132 (5 µM)培育 24小時。固定并透化沉淀的細胞。接著根據(jù)說明書的指示，在室溫下用 300 µL PROTEOSTAT® 聚集小體檢測試劑盒 （Enzo Life Sciences）培育細胞30分鐘，加入1 mg/L DAPI （用來測定細胞周期）。S值聚集小體小傾向的因子（APF）相對增加，G1和G2m的S值是通過每次細胞處理后檢測的結(jié)果和對照組相比而得出。S期和G1相比，ER 應(yīng)激誘導(dǎo)劑、Tg和 50 µM CQ的聚集小體數(shù)量呈上升趨勢，同時顯示蛋白酶體抑制劑，MG-132和50μMCQ下降的聚集小體數(shù)量在G2M S期比對照水平更低。 |
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| ENZ-51035-K100 | ProteoStat® Aggresome detection kit ProteoStat® 蛋白聚集小體檢測試劑盒 | 100 tests |
| ENZ-51035-0025 | 25 tests |