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					上海雙贏生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>人組織蛋白酶B（cath-B）elisa試劑盒操作步驟
            
			
            
			
		
            
		
            
            
            




	    		
	    		
	    	
                       
            
				
            
					
             人組織蛋白酶B（cath-B）elisa試劑盒操作步驟
            
					
            
						閱讀：885        發(fā)布時間：2015-3-30
					
            
					
            
						   
            人組織蛋白酶B(cath-B)elisa試劑盒操作步驟
            1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
            48pg/ml  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            24pg/ml  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            12pg/ml  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            6pg/ml  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            3pg/ml  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
            3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
            4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
            5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
            重復(fù)5次，拍干。
            6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
            7.  溫育：操作同 3。
            8.  洗滌：操作同 5。
            9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
            10 分鐘.
            10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
            11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
            
					
            
                    					
            
						
						
					
            
				
            
			
            	   
      
            
      





            
    

            

    
            
        
            
            
            
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