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            上海雙贏生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>人組織蛋白酶B(cath-B)elisa試劑盒操作步驟

            人組織蛋白酶B(cath-B)elisa試劑盒操作步驟

            閱讀:885        發(fā)布時間:2015-3-30

            人組織蛋白酶B(cath-B)elisa試劑盒操作步驟

            1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

            48pg/ml  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            24pg/ml  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            12pg/ml  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            6pg/ml  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            3pg/ml  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

            4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

            重復(fù)5次,拍干。

            6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

            7.  溫育:操作同 3。

            8.  洗滌:操作同 5。

            9.  顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

            10 分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。

            11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

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