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            上海雙贏生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>大鼠α淀粉酶(AMS)elisa試劑盒操作步驟

            大鼠α淀粉酶(AMS)elisa試劑盒操作步驟

            閱讀:1127        發(fā)布時(shí)間:2015-3-30

            大鼠α淀粉酶(AMS)elisa試劑盒操作步驟

            操作步驟

            1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

            240μmol/L  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            120μmol/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            60μmol/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            30μmol/L  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            15μmol/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

            3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

            4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

            5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

            重復(fù) 5 次,拍干。

            6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

            7.  溫育:操作同 3。

            8.  洗滌:操作同 5。

            9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

            10 分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。

            11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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