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            波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒實驗反應(yīng)五要素

            閱讀:1100      發(fā)布時間:2021-3-3
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            波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒實驗反應(yīng)五要素:

            參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
            引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
            ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
            ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
            ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
            ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
            ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
            ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
            ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
            引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

            綿羊白介素2(IL-2)elisa試劑盒
            綿羊主要組織相容性復(fù)合體(MHC)elisa試劑盒
            綿羊白介素6(IL-6)elisa試劑盒 
            綿羊白介素1β(IL-1β)elisa試劑盒
            綿羊白介素1(IL-1)elisa試劑盒
            綿羊補體片段3b受體(C3bR)elisa試劑盒
            綿羊白介素2受體(IL-2R)elisa試劑盒
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            猴白介素2(IL-2)elisa試劑盒
            猴Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa試劑盒 
            猴Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)elisa試劑盒
            猴透明質(zhì)酸(HA)elisa試劑盒 
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            猴載脂蛋白B100(apo-B100)elisa試劑盒 
            猴載脂蛋白A1(apo-A1)elisa試劑盒 
            猴白介素6(IL-6)elisa試劑盒
            猴γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒
            猴胰島素(INS)elisa試劑盒 

             

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