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            植酸酶生化檢測(cè)試劑盒的測(cè)定原理

            閱讀:1107      發(fā)布時(shí)間:2024-9-26
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            測(cè)定意義:
            植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對(duì)環(huán)境的污染,改善營養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。
            測(cè)定原理:
            植酸酶在一定溫度和pH值條件下,水解底物植酸鈉生成無機(jī)磷與肌醇衍生物,無機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,在700nm處有特征吸收峰,根據(jù)700nm處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。
            組成和配置:
            試劑一:液體×1瓶,室溫保存。
            試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              
            試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。
            試劑四:液體×1支,4℃保存。
            粗酶液提取:
            1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。
            2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g,4℃離心20min,取上清液置冰上待測(cè)。
            3、血清等液體:直接測(cè)定。

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