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實(shí)驗(yàn)步驟

1. 細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

2. 細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長(zhǎng)24小時(shí)后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。

3. 不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過(guò)孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號(hào)的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。

4. 在垂直與*條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。

5. 劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細(xì)胞。

6. 每孔添加新鮮培養(yǎng)基。

7. (培養(yǎng)基中含有某些成分，如抑制/促進(jìn)細(xì)胞遷移和/或增殖的化學(xué)物質(zhì))。

8. 細(xì)胞生長(zhǎng)48小時(shí)(或根據(jù)時(shí)間需要)。

9. 1xPBS清洗細(xì)胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。

10. 0.1%的結(jié)晶紫(2%乙醇溶解)染色30分鐘。

11. 染色的單層細(xì)胞選取不同的視野，顯微鏡拍照。gap的距離可通過(guò)Photoshop或ImagJ軟件測(cè)量.為了降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可變性，建議每孔選擇多個(gè)視野觀察，每組做多個(gè)重復(fù)。