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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

RA-FLS類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MDA-MB-415(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人狀腺原酸(T3)ELISA 試劑盒 Rabbit Anti-IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml

GRM4： 促代謝型谷酸受體4抗體 EPHA3 Others Rat 大鼠 EphA3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞HM 人腮腺炎病毒IgM ELISA 試劑盒 Rabbit Anti-IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml

GST tag： GST標(biāo)簽蛋白抗體 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;Lec1 高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞，HO-8910PM細(xì)胞 SCF細(xì)胞，白鰱尾鰭細(xì)胞

TNFSF8 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人腮腺炎病毒IgG ELISA 試劑盒 Rabbit Anti-IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml

OGG1： 8-羥基DNA糖基化酶 0.1ml

Rhesus antibody Rh GPV/Goose parvovirus 鵝細(xì)小病毒GPV抗體 肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

marc-145-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)猴胚胎腎上皮細(xì)胞 Marc-145-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin 大鼠絡(luò)絲蛋白(RL)ELISA試劑盒 ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78)  小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78 96T

OR10J3： 嗅覺受體家族10亞基J3抗體 TGFBI Others Human 人 BIGH3 / BIG-H3 / TGFBI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

貓腎細(xì)胞;CRFK 大鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA試劑盒 HO-2  大鼠血紅素氧合酶2 96T

RA-FLS類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞KAT2B： 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶PCAF抗體 PROK1 Others Human 人 EG-VEGF / prokineticin-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人視網(wǎng)膜muller細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 雞可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA 試劑盒 IAA/BSA 吲哚-3-乙酸偶聯(lián)血清白蛋白 5mg

Phospho-c-Kit(Ser741)： 0酸化原癌基因c-kit抗體 NRK-52E，大鼠腎細(xì)胞 Sars蛋白表達(dá)株，293sars181A細(xì)胞 NCI-H1703 [H1703](人肺癌細(xì)胞)

IL13RA2 Others Rat 大鼠 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 雞可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA 試劑盒 IL-17(Interleukin-17) 白介素-17抗原 0.5mg

Phospho-c-Kit(Ser721)： 0酸化原癌基因c-kit抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;Mao