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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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更新時(shí)間：2025-04-29 09:44:53瀏覽次數(shù)：1712
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取材與預(yù)處理
組織獲取：需無(wú)菌操作快速獲取新鮮組織（如肝臟、心肌等），避免機(jī)械損傷和干燥。例如，肝細(xì)胞分離需麻醉大鼠并進(jìn)行肝臟灌流；骨髓細(xì)胞需剪開(kāi)小鼠下肢并沖洗骨髓
組織處理：剪碎組織至1-3 mm3小塊，便于后續(xù)消化。
細(xì)胞分散
酶消化法（常用）：使用胰蛋白酶、膠原酶等消化細(xì)胞外基質(zhì)，釋放單個(gè)細(xì)胞。不同組織需調(diào)整酶濃度和作用時(shí)間（如小鼠腎臟需嚴(yán)格控制消化時(shí)間）。
機(jī)械法：通過(guò)剪切、研磨或擠壓分散組織，適用于堅(jiān)硬組織（如心?。┗蚶w維少的組織（如腦組織）。
懸浮離心法：低速離心分離血液或腹水中的細(xì)胞，利用密度差異分層收集。
純化與培養(yǎng)
梯度離心/差異貼壁：去除雜質(zhì)細(xì)胞（如紅細(xì)胞）或利用貼壁速度差異純化目標(biāo)細(xì)胞（如心肌細(xì)胞）。
培養(yǎng)條件：使用含生長(zhǎng)因子（如EGF、bFGF）的培養(yǎng)基，并根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型調(diào)整血清濃度（如軟骨細(xì)胞需低濃度胎牛血清）。
| 方法 | 操作要點(diǎn) | 適用組織 | 優(yōu)缺點(diǎn) | 來(lái)源 |
|---|---|---|---|---|
| 酶消化法 | 胰蛋白酶/膠原酶消化，控制時(shí)間和濃度 | 實(shí)體組織（皮膚、腫瘤等） | 高效但需優(yōu)化條件，避免過(guò)度損傷細(xì)胞 | |
| 機(jī)械分散法 | 剪切、研磨或擠壓（如注射器針頭壓出細(xì)胞） | 堅(jiān)硬組織（骨骼?。┗蚰X組織 | 快速但細(xì)胞損傷大，純度較低 | |
| 懸浮離心法 | 低速離心（1000 rpm，10分鐘） | 血液、羊水等懸液 | 操作簡(jiǎn)便，但僅適用于懸浮細(xì)胞 | |
| 試劑盒法 | 正向選擇（抗體捕獲）或負(fù)向選擇（去除雜質(zhì)） | 復(fù)雜組織（如PBMC中分離T細(xì)胞） | 高純度但成本較高 |
無(wú)菌操作：全程在超凈臺(tái)中進(jìn)行，避免污染。
酶活性控制：預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳酶濃度和作用時(shí)間，消化后需用含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
細(xì)胞活力檢測(cè)：使用臺(tái)盼藍(lán)染色法評(píng)估細(xì)胞存活率（如原代肝細(xì)胞需活力＞85%）
。
標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)：不同實(shí)驗(yàn)室條件差異可能影響結(jié)果，需統(tǒng)一培養(yǎng)基和傳代流程。
快速消化法（RD法） ：將軟骨細(xì)胞分離時(shí)間從12-16小時(shí)縮短至3小時(shí)，提高存活率和增殖活性。
改良培養(yǎng)基：添加維生素C或PLGA納米顆粒，減少血清依賴(lài)并維持細(xì)胞功能。
3D培養(yǎng)技術(shù)：結(jié)合酶消化法分離細(xì)胞后，模擬體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行三維培養(yǎng)，提升研究真實(shí)性。
