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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2023-08-29 10:32:29瀏覽次數(shù)：1796
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| 產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
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實驗共分以下4個主要步驟:
1.細(xì)胞鋪盤
HeLa S3細(xì)胞，密度為80%左右分盤，使鋪盤密度在50%左右， 為滿足流式細(xì)胞儀上機要求，細(xì)胞數(shù)目需大于1x10組。2.細(xì)胞同步化處理:
a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h
b)用溫育的PBS洗4次，更換新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)9h
c)再加入2mM Thymidine再次同步化18h后
3.樣品收集;
a)分別收取釋放2h(S期)，6h(G2/M期)和12h(G1期)細(xì)胞樣品
b)每個樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次，1000g離心5min, 棄上清
c) 100uL PBS重懸沉淀，吸取出細(xì)胞懸液于移液器中，于移去細(xì)胞的管中加入900μl預(yù)冷的70%乙醇，旋渦振蕩器震蕩中滴入細(xì)胞懸液。
d) 4C固定一小時或更 長時間。
e) 1500rmp，離心10min,去固定液。
f)細(xì)胞染色液配制: 50xRNase A母液: 50xPI母液: PBS=20: 20: 960; RNase A母液濃度1mg/mL，工作濃度20μg/mL; PI母液濃度2.5mg/mL, 工作濃度50μg/mL 。
g)細(xì)胞37度染色1h。根據(jù)細(xì)胞童，加入一定體積的細(xì)胞染色液(1~1.5mL) 重懸，使上機時細(xì)胞通過率為
200~350Cl/s，,染色液不可過多或過少，過多則細(xì)胞密度過低上機速度嚴(yán)重不足，過少則導(dǎo)致細(xì)胞粘結(jié)。
h) 300目篩網(wǎng)過濾至流式管中。
4.上機檢測;
流式細(xì)胞儀上機檢測，計數(shù)50000個細(xì)胞。
5.同步化數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)使用ModFit軟件分析。
