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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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TA克隆
TA克隆方法（TA Cloning）：把PCR片斷與一個(gè)具有3-T突出的載體DNA連接起來(lái)的方法。因?yàn)镻CR反應(yīng)中所適用的聚合酶具有末端轉(zhuǎn)移的活性，通常在3加上A。例如：Taq聚合酶同時(shí)具有的末端連接酶的功能，PCR反應(yīng)時(shí)在每條PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的3端自動(dòng)添加一個(gè)3-A突出端。只有用經(jīng)過(guò)特殊處理的具有3-T突出末端的DNA的片斷才能通過(guò)T/A配對(duì)進(jìn)行連接。
通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增目的基因片斷的過(guò)程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，獲得的目的片斷通常需要通過(guò)TA克隆的方法，重組到T-載體中，通過(guò)序列測(cè)定清楚DNA序列。由于在PCR過(guò)程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分為2種情況：（1）使用不同的Taq酶，在PCR擴(kuò)增循環(huán)結(jié)束后，加上72℃ 10分鐘一個(gè)過(guò)程，Taq酶可以在擴(kuò)增產(chǎn)物的3末端加上A，因此PCR產(chǎn)物回收純化后可以和T載體直接連接。（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在擴(kuò)增產(chǎn)物的3末端加上A，得到的DNA序列為鈍端，因此，需要在回收純化后進(jìn)行加A的過(guò)程，通常是以PCR回收產(chǎn)物為模板，加上量的普通Taq酶和反應(yīng)液，加入dATP（或dNTP），72℃10分鐘，然后將加A產(chǎn)物直接用于TA連接。
TA克隆實(shí)驗(yàn)材料要求：未純化的PCR產(chǎn)物及PCR電泳圖片，PCR擴(kuò)增引物序列PCR擴(kuò)增用酶，如果使用含3'→5'外切酶活性的聚合酶，請(qǐng)?zhí)峁㏄CR引物，我們將重新擴(kuò)增PCR產(chǎn)物以能進(jìn)行TA克隆操作。
TA克隆服務(wù)說(shuō)明
1、PCR產(chǎn)物TA克隆實(shí)驗(yàn)中，PCR片段越大，TA克隆難度越大；2、TA克隆實(shí)驗(yàn)中，我們使用的是大家常用 T載體作為標(biāo)準(zhǔn)T載體，如果對(duì)載體有特殊要求，請(qǐng)?jiān)賹?shí)驗(yàn)之前告知客戶服務(wù)人員。
如果您對(duì)我們的TA克隆感興趣或有疑問(wèn),
