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廣州同譜實驗儀器有限公司
主營產(chǎn)品： kromasil色譜柱,通用石墨管,SPE固相萃取小柱 |
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2021-3-16 閱讀(2644)
應用簡介
本實驗重現(xiàn)了《食品中丙烯酰胺的測定》GB 5009.204-2014中首一法——穩(wěn)定性同位素稀釋的液相色譜-質譜/質譜法（LC-MS/MS），樣品經(jīng)超純水提取，先后經(jīng)Cleanert® PEP和Cleanert® SAS固相萃取柱凈化，Venusil® MP C18色譜柱（2.1 × 150 mm，5 μm，100 Å）分離，0.1%的甲酸水溶液作為流動相洗脫，三重四級桿質譜檢測，內標法進行定量。結果表明：當丙烯酰胺的加標量為2 mg/kg時，回收率在100% ~ 115%，可以滿足檢測要求。
丙烯酰胺（acylamide；CAS登記號79-06-1）是一種無色、無臭透明片狀晶體；可溶于水、醇、丙酮、醚和三氯甲烷，微溶于甲苯，不溶于苯和庚烷。相對分子質量為71.08，結構式如圖1所示。丙烯酰胺是一種*的神經(jīng)毒素和準致癌物，動物實驗和體外細胞實驗都證明丙烯酰胺還可導致遺傳物質發(fā)生改變，早在2005年癌癥研究機構就已將其列為2*致癌物質。2002年4月，瑞典國家食品管理局發(fā)現(xiàn)許多含淀粉的食物經(jīng)過煎、烤、炸等高溫烹調后會產(chǎn)生高含量的丙烯酰胺。眾多研究表明薯條、薯片等土豆制品中丙烯酰胺的含量非常高，超過飲用水中允許大限度的500多倍。
因此通過有效的實驗技術手段，對食品中的丙烯酰胺進行監(jiān)控，以確保消費者對食品消費的安全具有重要意義。
本實驗通過優(yōu)化前處理方法建立了丙烯酰胺在食品中的LC-MS/MS方法。
實驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設備
AB SCIEX API 4000+液相質譜聯(lián)用儀；
試劑材料
某品牌原味薯片、油條；甲酸、甲醇、正己烷皆為色譜純；屈臣氏水；丙烯酰胺標準品（純度 > 99%），用水溶；
D3-丙烯酰胺標準溶液（CD2=CDCONH2）（濃度500 mg/L，溶劑乙腈）;80%甲醇水溶液：取20 mL水，加甲醇稀釋定容至100 mL；
0.1%甲酸溶液：移取100 μL甲酸并加入100 mL水，搖勻；一次性無菌注射器；尼龍針式過濾器(0.22 μm，直徑13 mm)；
Cleanert® PEP固相萃取柱：200 mg/6 mL；Cleanert® SAS固相萃取柱：200 mg/3 mL。
樣品制備
樣品提取
準確稱取粉碎后的1 g樣品置于50 mL離心管中，加入200 μL D3-丙烯酰胺內標（1 mg/L），再加入10 mL水，超聲振蕩30 min后，于8000 r/min離心5 min，將上清液轉移到15 mL離心管中，加入5 mL正己烷，漩渦萃取1 min，以6000 r/min的速度離心5 min，除去上層有機相，再用5 mL正己烷重復萃取一次，之后迅速取5 mL水相作為上樣液。
樣品凈化
Cleanert® PEP固相萃取柱（200 mg/6 mL）使用前依次用3 mL甲醇、3 mL水活化，將上述上樣液上Cleanert® PEP固相萃取柱，收集上樣液，并用4 mL 80%的甲醇水溶液洗脫，合并收集全部洗脫液，該洗脫液待用Cleanert®SAS固相萃取柱凈化；Cleanert®SAS固相萃取柱（200 mg/3 mL）依次用3 mL甲醇、3 mL水活化，將上述洗脫液全部上樣，在重力作用下流出，收集全部流出液，并用2 mL甲醇洗脫，合并收集全部洗脫液。于40℃下氮吹濃縮至近干，用水定容至1 mL，待LC-MS/MS檢測。
注：上述操作步驟可在Qdaura®卓睿全自動固相萃取儀上完成。
色譜條件
液相條件
色譜柱：Venusil® MP C18，5 μm，100 Å，2.1 × 150 mm；
流動相： 0.1%甲酸水溶液；
柱 溫：26℃；
流 速：0.2 mL/min；
進樣量：2 μL。
質譜條件
離子源：ESI+；電噴霧電壓：5500 V；霧化氣壓力：45 psi；氣簾氣壓力：10 psi；輔助氣壓力：45 psi；離子源溫度：330℃；采集方式：多反應監(jiān)測(MRM)。
表1. 丙烯酰胺質譜參數(shù)
物質名稱 | Q1 | Q3 | CE/V |
丙烯酰胺 | 72 | 55 | 15 |
44 | 15 | ||
D3-丙烯酰胺 | 75 | 58 | 16 |
44 | 25 |
結果與討論
線性關系
分別配制濃度為0.01 mg/L、0.05 mg/ L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、3 mg/L的丙烯酰胺標準溶液（內標：0.1 mg/L），進行液相色譜-質譜/質譜檢測，以各標準溶液的丙烯酰胺進樣濃度（mg/L）為橫坐標，以丙烯酰胺的峰面積與內標D3-丙烯酰胺的峰面積比值為縱坐標，繪制標準曲線，如圖2所示，擬合參數(shù)如表2。
表2. 丙烯酰胺標準曲線和檢出限
化合物名稱 | 標準曲線方程 | 相關系數(shù) | 檢出限(mg/L，S/N = 3) |
丙烯酰胺 | Y=9.41X + 0.0706 | 0.9999 | 0.005 |
實驗結果
由表3可知，采用固相萃取結合液相色譜-質譜/質譜法檢測丙烯酰胺，內標法定量，丙烯酰胺的加標回收率在100% ~ 115%之間，滿足檢測要求。
表3.丙烯酰胺加標回收實驗結果(n=3)
物質名稱 | 添加水平 | 出峰時間 | 平均回收率（%） | RSD（%） | ||
薯片 | 油條 | 薯片 | 油條 | |||
丙烯酰胺 | 2 mg/kg | 3.56 | 108.6 | 113.6 | 3.33 | 2.77 |
結論
本實驗依據(jù)《食品中丙烯酰胺的測定》GB 5009.204-2014中首一法——穩(wěn)定性同位素稀釋的液相色譜-質譜/質譜法建立了食品中丙烯酰胺的檢測方法，并用內標法結合LC-MS/MS對食品中丙烯酰胺含量進行了測定。當加標量為2.0 mg/kg時，回收率在100% ~ 115%之間，符合要求。
附：相關產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格描述 | 包裝數(shù)量 | 訂貨號 |
Venusil® MP C18 | 5μm,100Å, 2.1×150 mm | 1支 | VA951502-0 |
Cleanert® PEP | 200mg/6mL | 30支 | PE2006 |
Cleanert®SAS | 200mg/3mL | 50支 | SS2003 |
Qdaura®卓睿全自動固相萃取儀 | 24位，四通道 | 1臺 | SPE-40 |
氮吹儀 | 15位 | 1臺 | NV15-M |
1.5 mL樣品瓶 | 短螺紋透明帶書寫處 32×11.6mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 mL樣品瓶蓋 | 9mm中心孔藍蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊 45°Shore A; 1.0mm | 100/pk | 0915-1819 |
針式過濾器(Nylon) | 單膜，13mm，0.22µm | 200個/包 | AS021320 |
一次性注射器 | 2 mL無針頭 | 100支/包 | LZSQ-2ML |
甲醇 | 4L/瓶，色譜純 | 4×4L/箱 | AH230-4 |
正己烷 | 4L/瓶，HPLC級 | 4×4L/箱 | AH216-4 |
