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            島津企業(yè)管理(中國(guó))有限公司

            島津應(yīng)用:曲妥珠單抗LC-MS/MS定量分析方法開(kāi)發(fā)

            時(shí)間:2017-1-16 閱讀:788
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            曲妥珠單抗是一種抗 Her2 的重組 DNA 衍生的人源化單克隆抗體,它通過(guò)將自己附著在 Her2 上來(lái)阻止人體表皮生長(zhǎng)因子在 Her2 上的附著,從而阻斷癌細(xì)胞的生長(zhǎng),曲妥珠單抗還可以刺激身體自身的免疫細(xì)胞去摧毀癌細(xì)胞。隨著曲妥珠單抗在臨床的廣泛應(yīng)用,對(duì)該藥物在人體血漿中定量檢測(cè)的精密度和準(zhǔn)確度要求也日益提高。

             

            隨著液相色譜和質(zhì)譜技術(shù)以及生物樣品分離技術(shù)的發(fā)展,LC-MS/MS 定量技術(shù)在蛋白質(zhì)定量研究中的應(yīng)用日益廣泛。相對(duì)于傳統(tǒng)的免疫分析方法(例如 ELISA),LC-MS/MS定量技術(shù)提高了蛋白分析的精密度和準(zhǔn)確度。基于質(zhì)譜法的蛋白定量在抗體藥物臨床前及臨床研究中受到越來(lái)越多的關(guān)注,為了使蛋白質(zhì)定量技術(shù)與藥物研究和臨床檢驗(yàn)更加緊密結(jié)合,島津公司將其超快速液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用平臺(tái)和強(qiáng)大的定量蛋白質(zhì)組學(xué)軟件 Skyline集成一體。根據(jù)蛋白質(zhì)序列和用戶自定義,Skyline 軟件可以用來(lái)設(shè)計(jì)、改善以及優(yōu)化選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)/多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)、全掃描質(zhì)譜和串聯(lián)質(zhì)譜定量法。Skyline 軟件不僅將結(jié)果和方法優(yōu)化結(jié)合起來(lái),也為蛋白質(zhì)定量的研究工作提供了標(biāo)準(zhǔn)化的工作流程。同時(shí)島津研發(fā)工程師們?yōu)楹?jiǎn)化復(fù)雜生物基質(zhì)中抗體藥物的定量分析工作,對(duì)抗體藥物前處理過(guò)程進(jìn)行了*的設(shè)計(jì),發(fā)明了 nSMOL 前處理試劑包,該方法能夠有效富集血漿/血清中的抗體藥物,實(shí)現(xiàn) Fab 區(qū)域的選擇性酶解,提高酶解效率,極大降低了酶解產(chǎn)物的復(fù)雜性,對(duì)于

            復(fù)雜生物基質(zhì)中抗體藥物的準(zhǔn)確定量提供了非常有利的工具。

             

            本文建立了一種使用島津超液相色譜儀 LC-30A 和三重四極桿質(zhì)譜儀 LCMS-8060Skyline軟件聯(lián)用建立血漿中曲妥珠單抗定量分析的工作流程。結(jié)合nSMOL前處理技術(shù),實(shí)現(xiàn)抗體藥物 Fab 區(qū)域選擇性酶解,從而顯著降低了方法開(kāi)發(fā)的復(fù)雜程度。在本實(shí)驗(yàn)篩選階段,共有 10 個(gè)肽段具有明顯的色譜峰,其中 8 條肽段與曲妥珠單抗的 Fab 區(qū)域相關(guān),而曲妥珠單抗具有代表性的特異性肽段集中于 Fab 區(qū)域,充分體現(xiàn)了 nSMOL 技術(shù)的高選擇性,從而極大地降低了酶解產(chǎn)物的復(fù)雜性,提高方法開(kāi)發(fā)的速度。實(shí)驗(yàn)通過(guò) Skyline 軟件完成MRM 通道的設(shè)計(jì)和方法的輸出,LabSolutions 基于 Skyline 導(dǎo)出的 MRM 分析方法,進(jìn)行肽段篩選、碰撞能量?jī)?yōu)化,zui終確認(rèn)曲妥珠單抗的特征肽段及其對(duì)應(yīng)的 MRM 離子對(duì)?;谝陨纤⒌姆椒ǎ疚耐瓿裳獫{中曲妥珠單抗藥物的定量分析方法開(kāi)發(fā),定量特征肽段為IYPTNGYTR542.80>404.70),線性范圍為 0.122 μg/mL~125 μg/mL。

             

            了解詳情,敬請(qǐng)點(diǎn)擊《基于nSMOL 技術(shù)和Skyline 軟件的曲妥珠單抗LC-MS/MS定量分析方法開(kāi)發(fā)

             

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