摘要

制備工藝被廣泛地應(yīng)用于許多領(lǐng)域，如從新合成的化合物中選擇性地篩選候選化合物或先導(dǎo)化合物，或用于對(duì)藥物中的雜質(zhì)、天然物質(zhì)中具有特定功能的組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。制備型超臨界流體色譜（簡稱制備SFC）具有分析時(shí)間短、后處理簡單等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)藥工業(yè)和許多其他領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。對(duì)于色譜峰數(shù)量有限的分析，如手性異構(gòu)體的分離，“迭加進(jìn)樣”可以提高制備純化的效率。本報(bào)告描述了一個(gè)使用Nexera UC 制備型超臨界流體色譜儀的“迭加進(jìn)樣”功能來提高制備操作效率的實(shí)例。

關(guān)鍵詞: 制備型SFC，迭加進(jìn)樣

1使用SFC以縮短分析時(shí)間

由于超臨界二氧化碳的低粘度和高擴(kuò)散系數(shù)，即使在高流速下，SFC的色譜柱壓也很低。這意味著可以在不犧牲色譜柱效的情況下提高分析速度。因此，其分析時(shí)間比高效液相色譜法要短得多。    

以奧美拉唑的手性分離為例，使用制備LC和制備SFC所需時(shí)間的對(duì)比如圖1所示，制備型SFC所用時(shí)間僅為制備型LC消耗時(shí)間的1/4，提升了分析效率。

圖.1 HPLC與SFC對(duì)奧美拉唑手性拆分的比較（制備型）

表1 分析條件

2迭加進(jìn)樣

“迭加進(jìn)樣”是一種標(biāo)配于SIL-40自動(dòng)進(jìn)樣器和FRS-40餾分收集器的連續(xù)進(jìn)樣技術(shù)，其利用色譜峰保留的時(shí)間間隔持續(xù)進(jìn)樣，從而節(jié)約分析時(shí)間提高分離效率，其工作原理如圖2所示。在進(jìn)行“迭加進(jìn)樣”設(shè)置時(shí)，需要特別注意以下幾點(diǎn)：

• 僅適用于等度分析

• 色譜峰之間不會(huì)相互重疊

圖.2 “迭加進(jìn)樣”工作原理

3“迭加進(jìn)樣”設(shè)置方法

“迭加進(jìn)樣”功能可以在LabSolutions工作站軟件中輕松設(shè)定。通過設(shè)定“進(jìn)樣間隔”、“進(jìn)樣次數(shù)”和“等待下一次預(yù)處理的時(shí)間”等參數(shù)（圖3），并使用單次運(yùn)行結(jié)果（色譜圖）模擬給定進(jìn)樣間隔的結(jié)果（圖4），可以很容易地確認(rèn)是否存在色譜峰重疊。若要連續(xù)進(jìn)樣，則必須設(shè)定適當(dāng)?shù)牡却龝r(shí)間，以便樣品從樣品環(huán)（圖5）中流出后，樣品環(huán)可以切換回LOAD狀態(tài)（圖5的右側(cè)）。  

圖.3 設(shè)定“迭加進(jìn)樣”參數(shù)（用于圖4）

圖.4 “迭加進(jìn)樣”模擬結(jié)果 (LabSolutions)

圖.5 樣品閥動(dòng)作 (FRS-40)

對(duì)于數(shù)據(jù)采集時(shí)間，輸入一個(gè)大于單次分析時(shí)長且加上進(jìn)樣間隔和進(jìn)樣次數(shù)的乘積。例如，以0.8分鐘的進(jìn)樣間隔連續(xù)進(jìn)樣9次，則輸入值至少為單次分析時(shí)長加上7.2分鐘（圖6）。

圖.6 數(shù)據(jù)采集時(shí)間 (SPD-M40)

在每次進(jìn)樣周期后將分餾閥返回其初始位置，則可以在同一瓶中收集相同的峰。因此，“迭加進(jìn)樣”方式可將同一化合物的所有峰收集在同一個(gè)收集瓶中。餾分收集將依據(jù)時(shí)間程序進(jìn)行，僅需輸入單次分析的時(shí)間程序，隨后工作站即可以自動(dòng)地根據(jù)進(jìn)樣間隔計(jì)算出餾分收集時(shí)間（圖7和8）

圖.7 “迭加進(jìn)樣”的復(fù)位時(shí)間

圖.8 復(fù)位時(shí)間與制備間隔的關(guān)系

4“迭加進(jìn)樣”用于手性樣品分離

以下介紹一個(gè)實(shí)際使用“迭加進(jìn)樣”分離手性藥物的案例，樣品為10mg/mL華法林溶液（甲醇）。分析條件如表2所示，所得色譜圖如圖9所示。結(jié)果表明，在10.5分鐘的分析時(shí)間內(nèi)，進(jìn)樣次數(shù)可由常規(guī)進(jìn)樣的3次增加到“迭加進(jìn)樣”的9次，提高了制備操作的效率。

表2 分析條件

圖.9 華法林分離實(shí)例