HPLC肽圖分析是蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)研究中極為重要的手段之一，不但可以比較重組與天然蛋白質(zhì)結(jié)果之間的同一性，確認基因工程上游和下游處理過程中是否發(fā)生差錯、重組產(chǎn)物中是否存在翻譯后修飾及未預(yù)期氨基酸的變異等，而且不同批次產(chǎn)品的肽譜比較可驗證工藝過程的穩(wěn)定性。因此，肽圖分析在生物技術(shù)藥物質(zhì)控中尤為重要。

目前肽圖分析常用方法主要是胰蛋白酶切RP-HPLC方法。蛋白樣品經(jīng)酶解后進入HPLC，進行色譜分離，保留時間不同的肽段依次進入紫外檢測器進行檢測。

島津的相關(guān)液相產(chǎn)品，例如Nexera-i系列、LC-40以及生物惰性兼容液相Nexera Bio均可實現(xiàn)蛋白類藥物的HPLC肽圖分析。

蛋白類藥物肽圖分析

電荷異構(gòu)體的存在將會影響到蛋白質(zhì)藥物的活性、結(jié)合能力、藥代動力學(xué)、免疫原性及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，從而影響藥物有效性、安全性及保質(zhì)期。同時，電荷異質(zhì)性的控制程度也反映了重組蛋白類藥物生產(chǎn)工藝的一致性。因此，在生物類似藥的研發(fā)及與原研藥的一致性評價研究中，電荷異質(zhì)性是工藝質(zhì)量控制的重要因素。

為了大限度地降低蛋白質(zhì)與固定相填料的離子相互作用及二者之間可能存在的吸附作用，電荷異質(zhì)性分析通常使用高離子強度的流動相，并且采用堿性或酸性分析條件。但是，高離子強度流動相和堿性/酸性分析條件給液相色譜儀的耐腐蝕性和系統(tǒng)穩(wěn)定性帶來嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。

ATP分析

糖基化是蛋白質(zhì)的一種重要翻譯后修飾，糖基分析主要包含唾液酸含量測定、單糖組成分析、糖基化位點測定、糖鏈結(jié)構(gòu)測定等。

唾液酸含量的測定是先將唾液酸從糖鏈上解離成游離狀態(tài)，再進行化學(xué)反應(yīng)實現(xiàn)衍生化，通過測定衍生化產(chǎn)物從而測定唾液酸含量，常用的方法有間苯二酚顯色法和HPLC法。間苯二酚顯色法是利用間苯二酚將游離的唾液酸進行衍生生成有色化合物，再用紫外分光光度法測定其含量；HPLC法是利用鄰苯二胺（OPD）對唾液酸進行衍生，然后用帶紫外檢測器的HPLC或者LC-MS/MS進行定量。

蛋白類生物藥糖型分析

蛋白質(zhì)藥物在其生產(chǎn)、貯藏、運輸、銷售以及用藥過程中由于外力因素的作用可能會產(chǎn)生聚集。蛋白質(zhì)聚集現(xiàn)象會導(dǎo)致蛋白藥活性和其在藥品中的濃度降低，并可能產(chǎn)生有害的毒理學(xué)作用和免疫應(yīng)答，甚至發(fā)生危及生命的藥物反應(yīng)。FDA關(guān)于聚集體的指導(dǎo)原則中就指出蛋白聚集體在人體內(nèi)極易產(chǎn)生免疫原性。

對于常見的蛋白質(zhì)低聚體（二聚~四聚體），非還原型聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDS-PAGE ）需要在變性條件下進行，一般會影響多聚體的檢測。而體積排阻色譜法（SEC）條件溫和，不會對蛋白的形態(tài)產(chǎn)生較大的影響。因此，SEC法能較準(zhǔn)確地檢測蛋白質(zhì)中的低聚體，是蛋白質(zhì)藥物開發(fā)、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究中常用的聚集體分析方法。

大小變異體，聚體分析

應(yīng)用案例：單抗藥物聚集體分析，推薦生物惰性液相

作為細胞生長的環(huán)境和營養(yǎng)來源，培養(yǎng)基的性能很大程度上決定了細胞密度和表達產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量，因此培養(yǎng)基是工藝開發(fā)重要的環(huán)節(jié)之一。其中，在生產(chǎn)工藝優(yōu)化和確認過程中，以及QC過程中，細胞上清液中氨基酸含量的監(jiān)測對細胞培養(yǎng)有著重大的意義。但是，離線衍生后使用HPLC分析，以及HPLC柱后衍生法檢測氨基酸等方法，不僅耗時耗力，并且對結(jié)果準(zhǔn)確度影響較大。因此，開發(fā)操作簡單、高效穩(wěn)定的分析方法，對氨基酸組成分析非常有意義。

24種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（雙波長同時檢測）