前言

雪卡毒素(也稱西加毒素)中毒是由雪卡毒素（CTXs）引起的，是世界上常見的食物中毒來源之一，據(jù)調(diào)查，CTXs每年大約造成5萬人中毒，是造成人類中毒分布較廣、人數(shù)較多的一種海洋毒素之一。目前發(fā)現(xiàn)CTX的類似物有30余個。

雪卡毒素是一種由底棲甲藻產(chǎn)生的熱穩(wěn)定脂溶性聚醚毒素，在天然樣品中以微量存在，當(dāng)濃度達(dá)到0.2μg/ kg時具有神經(jīng)毒性作用，CTXs的半數(shù)致死量（median lethal dose，LD 50）為0.45 μg/kg，比河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）的毒性還要強(qiáng)100倍，是重要的神經(jīng)毒素。美國 FDA 和 EFSA 建議控制水平為 0.01 μg CTX1B 當(dāng)量/kg。

根據(jù)島津新發(fā)布的一項技術(shù)，通過向流動相中添加非常少量的堿金屬（如Na+和Li+）來優(yōu)化一種使用鈉和鋰加合物[M+Na]+和[M+Li]+離子檢測CTXs的高靈敏度方法。通過這項技術(shù)，可以使用LCMSMS成功分離及檢測FDA推薦的低濃度的CTXs。本文介紹了[M+Li]+新方法的分析條件和準(zhǔn)確度。

CTXs標(biāo)準(zhǔn)品

l                      1、5種CTX類似物的標(biāo)準(zhǔn)品由JFRL（日本食品分析中心）提供

l                      2、9種CTX類似物的混標(biāo)樣品由NIHS（日本國立醫(yī)藥品食品衛(wèi)生研究所）提供

分析條件

儀器型號Nexera X3 UHPLC+LCMS-8060NX

分析結(jié)果

1、[M+Na]+或[M+Li]+離子的形成和碰撞能（CE）的優(yōu)化

在流動相中添加Na+或Li+會通過陽離子化增加鈉或鋰加合物的形成。為了獲得所需的離子[M+Na]+或[M+Li]+ ，可在流動相中加入微量堿金屬。下圖為不同流動相條件下CTX1B的分析示例，本研究中分析的其他目標(biāo)化合物也獲得了相同的結(jié)果。當(dāng)向流動相中添加Li+時，未檢測到 [M+Na]+。這些結(jié)果表明，可以通過使用[M+Li]+等替代離子來實現(xiàn)更高的靈敏度。

考察不同流動相條件下CTX1B的分析結(jié)果（SIM）

但是，[M+Na]+和[M+Li]+母離子沒有提供任何有用的產(chǎn)物離子，因此優(yōu)化CE用以監(jiān)測[M+Na]+>[M+Na]+或[M+Li]+>[M+Li]+在MRM分析模式下提供最高的信噪比。CTX1B的優(yōu)化CE如下表所示。其余8種類似物的最佳CE以類似的方式進(jìn)行了優(yōu)化。

CE與峰面積或信噪比之間的關(guān)系

2、改善色譜峰分離度和靈敏度

在下圖中，比較了使用文獻(xiàn)方法、添加Na的流動相（b）和添加Li的流動相（c）對目標(biāo)化合物的分離。2,3-dihydroxyCTX3C和51-hydroxyCTX3、49-epi-CTX3C和CTX3C、CTX4A和CTX4B在新條件下表現(xiàn)出明顯更好的分離。除2,3-dihydroxyCTX3C和51-hydroxyCTX3外的6種類似物和CTX3C在加Na流動相中具有良好的靈敏度。實驗證實，使用添加Li的流動相時，9 種CTX類似物的靈敏度相當(dāng)。

9 種CTX類似物的MRM色譜圖（1 ng/mL NIHS混標(biāo)樣品）

3、定量限（LOQ）的評估

使用JFRL標(biāo)準(zhǔn)品生成校準(zhǔn)曲線，以確認(rèn)[M+Li]+> [M+Li]+ 。校準(zhǔn)曲線最低點的每個色譜圖如下圖所示。確定校準(zhǔn)曲線的范圍，使每個校準(zhǔn)點的3次重復(fù)分析的平均準(zhǔn)確度為100±5%，并指定最低點作為 LOQ。用5 g魚肉制備1 mL測定溶液時，5種標(biāo)準(zhǔn)品的LOQ范圍為0.0004至0.0012μg/kg。

校準(zhǔn)曲線最低點的MRM色譜圖

小結(jié)

島津最新的技術(shù)介紹了一種通過向流動相添加微量堿金屬（如Na+和Li+）來提高CTX檢測靈敏度的方法。這項工作成功證明了使用LC/MS/MS在低濃度下分離和檢測CTX類似物，符合FDA限度要求。

注：本產(chǎn)品僅用于研究，不能用于醫(yī)療診斷目的。