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導讀

上一篇《《中國藥典》0512高效液相色譜法修訂公示稿梳理  梯度延遲體積應對方案》介紹使用島津液相色譜儀截止環(huán)功能和調整梯度起點功能可以作為一種方式應對方法開發(fā)時的系統(tǒng)與實際使用系統(tǒng)之間滯留體積的差異。本篇介紹在溶液制備中出現溶劑效應問題如何解決！

l                      溶劑效應概念及對分析的影響

在公示稿“溶液制備”章節(jié)中，提到為減少溶劑峰和色譜峰的畸變，制備供試品溶液和參比物質溶液可用流動相（或梯度起始比例流動相組成）作為溶劑，這是首次在0512通則修訂公示中收載溶劑效應解決方式。

溶劑效應：樣品注入色譜系統(tǒng)后，兩端靠近流動相的目標物逐漸擴散進入流動相，中心區(qū)域目標物仍溶在原溶劑中，目標物進入色譜柱后，流動相氛圍中的目標物以正常速度被洗脫，溶劑氛圍中的目標物因強溶劑洗脫，移動速度快，樣品在空間上開始分裂，即樣品溶劑的洗脫強度強于流動相強度而導致的色譜峰展寬，分叉(嚴重時分裂)的現象，另外在多個項目中我們發(fā)現可能會出現峰形前延、肩峰等現象，而峰形較差會顯著影響定性和定量指標。

在梯度洗脫中，溶劑效應對出峰較早的色譜峰影響更為明顯。溶劑效應會影響峰形，從而影響理論塔板數、分離度等，應盡可能改善該現象！

l                      溶劑效應解決辦法

1. 使用初始流動相溶解待測樣品，公示稿首次收載該方法。

2. 減少進樣體積，需要注意靈敏度是否滿足標準要求。

3. 增加柱前管路的體積，需要改配置。

4. Co-injection（共同注入） 進樣功能，軟件中可直接選擇該模式，操作簡便。

l                      推薦儀器方案

l                      應用案例

1、《中國藥典》2020年版第一增補本 石淋通片【指紋圖譜】

《中國藥典》2020年版第一增補本中，石淋通片增加了【指紋圖譜】和【含量測定】的項目。在進行對照品夏佛塔苷進樣過程中，發(fā)現了較嚴重的溶劑效應，可見以上對比圖。使用標準進樣方式，由于溶劑效應會導致峰分叉，采用 Co-injection 進樣功能可有效解決此問題。

2、《中國藥典》2020年版  2341第五法  藥材及飲片（植物類）中禁用農藥多殘留測定法

禁用農藥相關檢測標準實施已經有三年，島津技術團隊在走訪幾十家企業(yè)和藥檢了解到，在出峰較早的化合物存在明顯的溶劑效應現象，導致峰形出現分叉（嚴重時出現分裂）、肩峰、峰展寬及峰前延等，以上展示是國內某藥品檢驗機構使用島津Co-injection功能有效解決了殺蟲脒和久效磷峰形問題。

3、《中國藥典》2020年版  2351第六法  多種真菌毒素測定法

島津技術團隊在復現標準中發(fā)現嘔吐毒素存在肩峰現象，使用Co-injection功能有效改善了峰形，并提升了響應。

4、杜仲配方顆粒國家藥品標準【含量測定】

杜仲配方顆粒標準起初要求理論塔板數按松脂醇二葡萄糖苷峰計算理論塔板數應不低于10000，在后續(xù)的修訂稿中修訂為不低于8000。島津技術團隊在走訪配方顆粒企業(yè)時，客戶提到即使修訂為8000的要求，對色譜柱選型要求還是很高，并且耐用性需要完善，島津技術團隊與客戶共同尋找背后可能存在的原因和解決辦法，最終發(fā)現兩種方案可以解決（Co-injection進樣功能或者優(yōu)化有機相比例為22%），兩種方案任選其一即可。

注：本文中所用數據均為島津實驗室特定條件下的測試數據，結果可能隨實際情況變動

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